[發明專利]一種以方竹種子為外植體高效繁育的方法

有效

• 申請號: 202110169342.6
• 申請日: 2021-02-07
• 公開（公告）號: CN112913692B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 王星;楊蒙;林樹燕;丁雨龍;周必鐃;卞麗麗;徐薪璐
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京燦爛知識產權代理有限公司 32356
• 代理人: 李志鴻

本發明屬于一種以方竹種子為外植體高效繁育的方法，包括以下步驟：選取5月初剛采收的方竹種子作為外植體材料，經過預處理、消毒、接種、叢芽誘導、培養和生根生成組培苗。本發明填補了方竹種子通過種子作為外植體快速繁殖得到叢苗的空白，以方竹種子為外植體材料，結合不同生長調節劑的組合，設計出適合誘導方竹叢芽和生根的培養基，完成方竹種子生根苗僅為20周左右，且能在短時間內獲得大量叢芽，有效解決了方竹繁殖困難，克服了傳統的母株移栽效率低、運輸成本高等缺點。

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域，具體涉及一種以方竹種子為外植體高效繁育的方法。

背景技術

方竹屬（Chimonobambusa）由日本學者牧野富太郎(Tomitaro Makino) 于1914年發表成立，當時方竹屬只有寒竹一個種。寒竹原產我國和日本，早在19世紀，就被引種到英國。方竹屬的竹種在長期演化過程中逐漸適應寒冷、喜濕和耐陰的環境，因此，它們主要分布在中高海拔的山地。方竹的自然分布在秦嶺以南各省區和西藏南部，但集中分布的地區在貴州、四川、重慶和云南等省區。向南延伸至越南和緬甸，向東延伸至日本。其中寒竹、方竹等觀賞價值以及經濟價值較高的竹種被廣泛引種栽培。

據確切記載，方竹曾經于1935-1938年在重慶南川的金佛山和相鄰貴州省桐梓縣的柏芷山和箐壩大山大面積開花。自1985年至今，方竹分布區內又出現多地零星開花現象，面積在半畝到十畝不等（張弘,鄒家云,王永燕.桐梓縣金佛山方竹開花結實的探討.竹子研究匯刊. 1994,13(2):66-69）。方竹的果實與我們常見的水稻、小麥和玉米等禾本科植物的果實一樣，都屬于穎果。但不同的是方竹的果實成熟時含水量較高，果皮（種皮）大多呈綠色或略帶一點紫色。因此，也稱為漿果狀穎果。近年來，桐梓縣利用方竹的實生苗進行大規模的造林。

隨著人們生活水平和文化水平的提高，竹子的經濟價值逐漸凸顯，其重要性愈加突出。方竹筍乃純天然保健食品，為筍中之王，世界一絕，中國獨有。一直以來，竹子繁殖主要以移竹、竹蔸、埋鞭、埋稈、埋節等傳統方法為主，這些方法具有消耗母竹多、種苗運輸不便、勞動強度大、繁殖系數低等缺點，尤其對資源稀少的珍貴竹種來說，傳統的繁殖方法受到了較大限制，難以快速規模化發展資源。針對這些問題，近幾年人們開始研究竹類植物新的繁殖方法，其中最直觀有效的就是竹類組織培養獲得再生植株。

國內有關竹子的組織培養最早開始于20世紀90年代，此后，關于竹類植物組織培養的研究日益增多，竹子的快繁技術受到愈來愈多的重視。目前對竹子以芽繁芽途徑大多數均采用稈莖段的方式，而關于通過以方竹種子為外植體高效快繁的方法未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種以方竹種子為外植體高效繁育的方法，以緩解方竹鮮筍市場集中供應，造成產品積壓、價格下降、竹農收益降低的問題，具有廣泛的經濟價值和推廣意義。

本發明的目的是提供一種以方竹種子為外植體高效繁育的方法，包括以下步驟：

S1外植體的預處理:選取5月初剛采收的方竹種子作為外植體材料，先將種子用洗潔精洗凈，流水下沖洗4～5h，然后用吐溫80浸泡10min，流水下再沖洗0.5～1h；

S2外植體的消毒: 在無菌操作臺上，將步驟S1處理好的方竹種子經70-80%酒精滅菌處理45-60s，無菌水沖洗3～5次，再用質量百分比為10%的次氯酸鈉溶液消毒15min，無菌水沖洗3～5次；

S3接種: 將步驟S2消毒后的種子接種至MS+2mg/L 6-BA基本培養基上；

S4叢芽誘導: 將得到的無菌方竹種子接種至MS+3mg/L 6-BA+0.5mg/L KT誘導培養基上進行叢芽誘導，誘導25 d后方竹種子先后生出具根以及2～3個芽的小苗；

S5叢芽培養: 將步驟S4中長有2～3個芽的小苗剪掉根及種子，并接種至MS+4mg/L6-BA+0.5mg/L TDZ增殖培養基中，培養40d后至叢芽形成，在增殖培養基中繼代2次，至大量叢芽形成；