[發明專利]一種以方竹種子為外植體高效繁育的方法

有效

• 申請號: 202110169342.6
• 申請日: 2021-02-07
• 公開（公告）號: CN112913692B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 王星;楊蒙;林樹燕;丁雨龍;周必鐃;卞麗麗;徐薪璐
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京燦爛知識產權代理有限公司 32356
• 代理人: 李志鴻

1.一種以方竹種子為外植體高效繁育的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1外植體的預處理:選取5月初剛采收的方竹種子作為外植體材料，先將種子用洗潔精洗凈，流水下沖洗4～5h，然后用吐溫80浸泡10min，流水下再沖洗0.5～1h；

S2外植體的消毒: 在無菌操作臺上，將步驟S1處理好的方竹種子經70-80%酒精滅菌處理45-60s，無菌水沖洗3～5次，再用質量百分比為10%的次氯酸鈉溶液消毒15min，無菌水沖洗3～5次；

S3接種: 將步驟S2消毒后的種子接種至MS+2mg/L 6-BA基本培養基上；

S4叢芽誘導: 將步驟S3得到的無菌方竹種子接種至MS+3mg/L 6-BA +0.5mg/L KT誘導培養基上進行叢芽誘導，誘導25 d后方竹種子先后生出具根以及2～3個芽的小苗；

S5叢芽培養: 將步驟S4中長有2～3個芽的小苗剪掉根和種子，并接種至MS+4mg/L 6-BA+0.5mg/L TDZ增殖培養基中，培養40d后至叢芽形成，在增殖培養基中繼代2次，至大量叢芽形成；

S6生根培養:將步驟S5得到的叢芽接種至生根培養基MS+4mg/L 6-BA+1mg/L NAA,培養30d至生根組培苗形成。

2.根據權利要求1所述的一種以方竹種子為外植體高效繁育的方法，其特征在于，所述基本培養基、誘導培養基、增殖培養基和生根培養基中均含有30g/L蔗糖和2.25g/L植物凝膠。

3.根據權利要求1所述的一種以方竹種子為外植體高效繁育的方法，其特征在于，步驟S2中所述次氯酸鈉溶液中滴加有3～4滴吐溫80。

4.根據權利要求1所述的一種以方竹種子為外植體高效繁育的方法，其特征在于，步驟S3、S4、S5和S6中培養溫度為25±1℃。

5.根據權利要求1所述的一種以方竹種子為外植體高效繁育的方法，其特征在于，步驟S3、S4、S5和S6中光周期為14h光照/10h黑暗。

6.根據權利要求5所述的一種以方竹種子為外植體高效繁育的方法，其特征在于，步驟S3、S4、S5和S6中培養物表面的光照強度為3000lx。