[發明專利]一種基于高通量測序的鮭科魚制品中動物源成分鑒別方法

在審

• 申請號: 202110168045.X
• 申請日: 2021-02-07
• 公開（公告）號: CN113293216A
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 陳穎;邢冉冉;王楠;張九凱;于寧
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6869
• 代理公司: 北京天盾知識產權代理有限公司 11421
• 代理人: 宋凌林

1.一種利用高通量測序技術鑒別鮭科魚制品中動物源性物種成分的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

(a) 從待測樣品中提取基因組DNA；

(b) 用帶有上下游標記的16S rRNA通用引物對（a）中所述基因組DNA進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；

(c) 對所述PCR擴增產物進行純化、測定濃度；

(d) 用上一步驟中達到濃度要求的PCR擴增產物構建測序文庫并進行質量檢驗；

(e) 對上一步測序文庫進行高通量測序，獲得16S rRNA基因片段序列；

(f) 將上一步所得16S rRNA基因片段序列與公共數據庫進行比對，根據測序序列與數據庫中已知序列的同源性確定鮭科魚制品中的動物源性物種成分；

其中，在步驟（f）中，若待測鮭科魚制品擴增所得16S rRNA基因片段某條測序序列與公共數據庫中某一動物的某條序列一致性大于等于97%，則所述待測鮭科魚制品含有該條序列在數據庫中所對應的動物物種; 若待測鮭科魚制品擴增所得16S rRNA基因片段某條測序序列與公共數據庫中某一動物的某條序列一致性小于97%，則所述待測鮭科魚制品中不含有或候選不含有該條序列在數據庫中所對應的動物物種。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述鮭科魚制品包括鮭科魚、鮭科魚加工品以及包含鮭科魚成分的食品。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（b）中其中上下游標記序列是不同的標記序列，用于標識不同的DNA模板，便于將不同樣品混合測序。

4.如權力要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（f）中生物信息學分析中分類學單元聚類（OTU）的閾值為97%；只有在至少2個重復中均檢測到該物種時，才認為該物種存在于樣品中；對于標簽中未標注的物種，當物種相對豐度高于2%時，才認為存在于樣品中。