[發明專利]一種間充質干細胞體外抑制Th1、Th17的檢測方法在審
| 申請號： | 202110161471.0 | 申請日： | 2021-02-05 |
| 公開（公告）號： | CN112725274A | 公開（公告）日： | 2021-04-30 |
| 發明（設計）人： | 朱灝 | 申請（專利權）人： | 華夏源（上海）生命科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 上海微策知識產權代理事務所(普通合伙) 31333 | 代理人： | 張靜 |
| 地址： | 200120 上海市浦東新區*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 間充質 干細胞 體外 抑制 th1 th17 檢測 方法 | ||
1.一種間充質干細胞體外抑制Th1、Th17的檢測方法，其特征在于，包括：
步驟一：間充質干細胞和外周血單個核細胞共培養；
步驟二：固定破膜染色和檢測。
2.根據權利要求1所述的間充質干細胞體外抑制Th1、Th17的檢測方法，其特征在于，所述步驟一包括：將間充干細胞和外周血單個核細胞混合，加入抗體培養后，離心，加入含有刺激劑的培養基刺激細胞后，加入抑制劑培養、離心，得到的細胞沉淀洗滌后，用平衡鹽溶液重懸，得到重懸溶液。
3.根據權利要求2所述的間充質干細胞體外抑制Th1、Th17的檢測方法，其特征在于，所述步驟一中，間充質干細胞和外周血單個核細胞的細胞數比為1：(5～15)。
4.根據權利要求2所述的間充質干細胞體外抑制Th1、Th17的檢測方法，其特征在于，所述抗體包括anti-CD3和anti-CD28。
5.根據權利要求4所述的間充質干細胞體外抑制Th1、Th17的檢測方法，其特征在于，所述anti-CD3的濃度為3～7μg/mL，所述anti-CD28的濃度為3～7μg/mL。
6.根據權利要求2所述的間充質干細胞體外抑制Th1、Th17的檢測方法，其特征在于，所述刺激劑包括PMA和Ionomycin。
7.根據權利要求6所述的間充質干細胞體外抑制Th1、Th17的檢測方法，其特征在于，所述含有刺激劑的培養基中，PMA的濃度為40～60ng/mL，Ionomycin的濃度為0.8～1.5μg/mL。
8.根據權利要求2～7任意一項所述的間充質干細胞體外抑制Th1、Th17的檢測方法，其特征在于，所述步驟二包括：將步驟一得到的重懸溶液中細胞用固定劑、破膜劑和染色抗體處理后，孵育、洗滌，去除上清液后，加入重懸溶液檢測。
9.根據權利要求8所述的間充質干細胞體外抑制Th1、Th17的檢測方法，其特征在于，所述步驟二包括：
將步驟一得到的重懸溶液細胞依次用固定劑、破膜劑和染色抗體處理后，孵育、洗滌，去除上清液后，加入重懸溶液檢測。
10.一種根據權利要求1～9任意一項所述的間充質干細胞體外抑制Th1、Th17的檢測方法在檢測間充質干細胞抑制淋巴細胞亞群的應用。
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