[發明專利]一種多重核酸擴增產物檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202110160212.6
• 申請日: 2021-02-05
• 公開（公告）號: CN112852928A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 何清聰;周侗;王晶;劉仁源;陳立勇;任青云
• 申請（專利權）人: 廣東東陽光藥業有限公司
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/70;C12Q1/689;C12R1/93
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• 代理人: 暫無信息

1.一種多重核酸擴增產物檢測方法，其特征在于，包括：建立包含顯示劑的擴增反應體系，所述擴增反應體系中還包含待測樣本、引物和擴增液；然后通過顯色染料法判讀擴增反應體系擴增結果；再根據判讀的擴增結果判斷是否進行試紙條檢測。

2.根據權利要求1所述多重核酸擴增產物檢測方法，其特征在于，包括步驟：

S1：建立擴增反應體系：提供待測樣本，所述待測樣本含有內參核酸；提供引物，所述引物包括內參引物和目標核酸修飾引物，將待測樣本、內參引物、目標核酸修飾引物、顯色劑和擴增液混合形成混合液，進行擴增反應，得到待測液；

S2：顯色染料法判讀擴增結果：觀察待測液中顯色劑的顯色反應，如未發生顯色變化，停止檢測，如發生顯色變化，進行下一步；

S3：試紙條檢測：將待測液轉移至試紙條進行檢測。

3.根據權利要求1所述多重核酸擴增產物檢測方法，其特征在于，包括步驟：

S1：建立擴增反應體系：提供待測樣本，所述待測樣本含有內參核酸；提供引物，所述引物包括內參引物和目標核酸修飾引物；

將待測樣本、目標核酸修飾引物、顯色劑和擴增液混合形成混合液，進行擴增反應，得到目標核酸待測液；

將待測樣本、內參引物、顯色劑和擴增液混合形成混合液，進行擴增反應，得到內參核酸待測液；

S2：顯色染料法判讀擴增結果：觀察內參核酸待測液中顯色劑的顯色反應，如未發生顯色變化，停止檢測，如發生顯色變化，進行下一步；

S3：試紙條檢測：將目標核酸待測液轉移至試紙條進行檢測。

4.根據權利要求1所述多重核酸擴增產物檢測方法，其特征在于，包括步驟：

S1：建立擴增反應體系：提供待測樣本，所述待測樣本含有內參核酸；提供引物，所述引物包括內參引物和目標核酸修飾引物；

分別將至少兩種不同的目標核酸修飾引物與待測樣本、顯色劑和擴增液混合形成混合液，進行擴增反應，得到不同的目標核酸待測液，得到的目標核酸待測液的數量與目標核酸種類數量相對應；

將待測樣本、內參引物、顯色劑和擴增液混合形成混合液，進行擴增反應，得到內參核酸待測液；

S2：顯色染料法判讀擴增結果：先觀察內參核酸待測液的顯色反應，如內參核酸待測液未反生顯色變化，停止檢測；如內參核酸待測液反生顯色變化，再觀察各不同的目標核酸待測液的顯色反應，如目標核酸待測液全部反生顯色變化，檢測結束；如目標核酸待測液未全部反生顯色變化，進行下一步；

S3：試紙條檢測：將未反生顯色反應的目標核酸待測液混合后轉移至試紙條進行檢測。

5.根據權利要求1所述多重核酸擴增產物檢測方法，其特征在于，在建立擴增反應體系時，擴增反應進行到設定的擴增反應時間的1/3-1/2時即可進行顯色染料法判讀擴增檢測結果，如待測液中的顯色劑未發生顯色反應，停止擴增反應；如待測液中的顯色劑發生顯色反應，繼續反應至擴增反應結束。

6.根據權利要求1所述多重核酸產物擴增檢測方法，其特征在于，所述引物包括內參引物和目標核酸修飾引物，所述目標核酸修飾引物使用標記物標記，所述標記物為熒光素、半抗原、化學發光探針中的任意一種或其組合。

7.根據權利要求1所述多重核酸擴增產物檢測方法，其特征在于，所述顯色劑為熒光染料或金屬離子指示劑。

8.根據權利要求7所述多重核酸擴增產物檢測方法，其特征在于，所述熒光染料為SYBRGreen I或PicoGreen，所述金屬離子指示劑為鈣黃綠素或羥基萘酚藍。

9.一種多重核酸擴增產物檢測試劑盒，使用權利要求1-8任意一項所述的多重核酸擴增檢測方法進行檢測，包括透明容器和試紙條，所述透明容器內設置有待測樣本、引物、顯色劑和擴增液。

10.根據權利要求9所述多重核酸擴增產物檢測試劑盒，其特征在于，不同的目標核酸修飾引物及內參引物分別與待測樣本、顯色劑和擴增液置于不同的所述透明容器內。