[發明專利]基于固態納米孔傳感器的miRNA檢測方法、檢測探針及試劑盒

在審

• 申請號: 202110159160.0
• 申請日: 2021-02-05
• 公開（公告）號: CN112795628A
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 翁麗星;武靈芝;嚴馨;曾祥杰
• 申請（專利權）人: 南京郵電大學
• 主分類號: C12Q1/6825
• 分類號: C12Q1/6825;C12N15/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

1.一種基于固態納米孔傳感器的miRNA檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)使用BSPP修飾金納米顆粒；

(2)將BSPP修飾的金納米顆粒與DNA探針孵育，室溫下輕輕搖動，得到檢測探針；所述檢測探針至少包括第一檢測探針以及第二檢測探針；所述第一檢測探針的DNA探針包括用于識別第一目標分子上游片段的第一捕獲鏈，所述第二檢測探針的DNA探針包括用于識別第一目標分子下游片段的第二捕獲鏈；

(3)在混合物中加入磷酸鈉緩沖液，該混合物在室溫下孵育；

(4)將所得混合物離心除去多余的DNA探針；使用磷酸鈉緩沖液進行復溶，離心2-3次；

(5)將步驟(4)得到的經過DNA探針修飾的金納米顆粒，與目標分子孵育；

(6)使用固態納米孔傳感器對檢測溶液進行檢測，使用膜片鉗記錄檢測到的軌跡電流信號。

2.根據權利要求1所述的基于固態納米孔傳感器的miRNA檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，所述檢測探針還包括第三檢測探針以及第四檢測探針；所述第三檢測探針的DNA探針包括用于識別第二目標分子上游片段的第三捕獲鏈，所述第四檢測探針的DNA探針包括用于識別第二目標分子下游片段的第四捕獲鏈；所述第三檢測探針以及第四檢測探針的金納米顆粒的直徑與第一檢測探針以及第二檢測探針的金納米顆粒的直徑不同；每個捕獲鏈的長度為6-12nt。

3.根據權利要求1所述的基于固態納米孔傳感器的miRNA檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，所述第一檢測探針以及第二檢測探針連接的金納米顆粒的粒徑為5nm。

4.根據權利要求2所述的基于固態納米孔傳感器的miRNA檢測方法，其特征在于，所述檢測探針還包括第三檢測探針以及第四檢測探針連接的金納米顆粒的粒徑為10nm。

5.根據權利要求1所述的基于固態納米孔傳感器的miRNA檢測方法，其特征在于，步驟(6)中，所述固態納米孔傳感器為氮化硅納米孔，納米孔的孔徑為40nm。

6.根據權利要求2所述的基于固態納米孔傳感器的miRNA檢測方法，其特征在于，所述第一目標分子或第二目標分子選自miR-21、miR-486、miR-375、miR-205、miR-486以及miR-708。

7.一種肺癌標志物miRNA靶分子的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(S1)使用BSPP修飾金納米顆粒，將BSPP加入金納米顆粒溶液，在室溫下振蕩過夜，將氯化鈉緩慢加入到混合物中，同時攪拌，直至顏色從深酒紅變成淺紫色；

(S2)將金納米顆粒與DNA探針孵育，室溫下輕輕搖動，得到檢測探針；所述檢測探針包括第一檢測探針、第二檢測探針、第三檢測探針以及第四檢測探針；所述第一檢測探針的金納米顆粒直徑為5nm，DNA探針如SEQ ID NO.1所示；所述第二檢測探針的金納米顆粒直徑為5nm，DNA探針如SEQ ID NO.2；所述第三檢測探針的金納米顆粒直徑為10nm，DNA探針如SEQID NO.3所示；所述第四檢測探針的金納米顆粒直徑為10nm，DNA探針如SEQ ID NO.4所示；

(S3)在混合物中加入磷酸鈉緩沖液，混合物在室溫下孵育；

(S4)將所得混合物離心除去多余的DNA探針；

(S5)將步驟(S4)得到的經過DNA探針修飾的金納米顆粒，與目標分子miRNA-21以及miRNA-486孵育；

(S6)使用固態納米孔傳感器對溶液進行檢測，使用膜片鉗記錄檢測到的軌跡電流信號。

8.一種用于固態納米孔傳感器的檢測探針，其特征在于，包括金納米顆粒以及與所述金納米顆粒連接的DNA探針，所述DNA探針包括與金納米顆粒連接的錨定鏈以及用于捕獲目標分子的捕獲鏈；所述檢測探針包括第一檢測探針以及第二檢測探針；所述第一檢測探針的DNA探針包括用于識別目標分子上游片段的第一捕獲鏈，所述第二檢測探針的DNA探針包括用于識別目標分子下游片段的第二捕獲鏈。