[發(fā)明專利]一種混合精斑提取工藝有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110158205.2 | 申請(qǐng)日： | 2021-02-04 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN112725332B | 公開（公告）日： | 2023-08-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 羅深恒;杜舟;王傳海;李湘琴;于瑞國;尹路;曲冬陽;王偉妮;張博;彭珊;朱冬明 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 廣州高盛智造科技有限公司;深圳市公安局刑事警察支隊(duì) |
| 主分類號(hào)： | C12N15/10 | 分類號(hào)： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 鞏克棟 |
| 地址： | 510530 廣東省廣州市高新技術(shù)產(chǎn)*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 混合 提取 工藝 | ||
本發(fā)明涉及一種混合精斑提取工藝。所述混合精斑提取工藝包括：對(duì)檢材進(jìn)行一次裂解，收集一次沉淀，對(duì)一次沉淀進(jìn)行二次裂解，收集二次沉淀，對(duì)二次沉淀進(jìn)行三次裂解，收集上清液，獲得含有男性DNA的溶液。本發(fā)明的混合精斑提取工藝，對(duì)檢材進(jìn)行兩次裂解消化女性成分，能夠縮短裂解處理周期并高效消化女性成分，且避免殘留的女性成分對(duì)后續(xù)分析男性DNA的影響。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于DNA提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種混合精斑提取工藝。
背景技術(shù)
強(qiáng)奸案中的女性陰道或內(nèi)褲、床單上遺留的精斑是最常見的混合檢材，經(jīng)過消化女性成分，可得到單一的男性分型。目前，常應(yīng)用Chelex-100法獲得精子DNA，但操作復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)，效率低，且DNA提取量少，不利于案件的快速偵破，因此，有大量研究嘗試對(duì)現(xiàn)有提取方法進(jìn)行改進(jìn)。
趙鐵軍(趙鐵軍.混合精斑DNA三種提取方法的比較[J].法醫(yī)學(xué)雜志,2004,020(004):237-237,239.)對(duì)Chelex-100法進(jìn)行改進(jìn)，提出Chelex-100二次處理法和Chelex-100+有機(jī)法，Chelex-100二次處理法為在Chelex-100法基礎(chǔ)上增加一次Chelex-100消化過程；Chelex-100+有機(jī)法為使用酚、氯仿和異戊醇混合液對(duì)Chelex-100法獲得的上清液進(jìn)行抽提，再使用冰乙醇氯化鈉溶液進(jìn)行處理。上述兩種方法均能提高DNA的提取量和純度，但仍存在操作復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)以及效率低的問題。
李紅霞(李紅霞,陳曉暉.精斑檢材的3種提取方法比較[J].中國法醫(yī)學(xué)雜志,2007,22(005):323-324.)等對(duì)Chelex-100法進(jìn)行優(yōu)化，使用磁珠法對(duì)Chelex-100法獲得的上清液進(jìn)行抽提，能夠顯著提高DNA的提取量并縮短操作時(shí)間，但操作復(fù)雜，且實(shí)驗(yàn)人員水平和環(huán)境變化都將影響分離效果，不利于推廣使用。
綜上所述，提供一種操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短且成本低的混合精斑提取工藝，對(duì)于法醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域具有重要意義。
發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足和實(shí)際需求，本發(fā)明提供一種混合精斑提取工藝，所述混合精斑提取工藝能夠高效分離檢材中的女性成分和男性成分，獲得高純度的男性DNA，且能在全自動(dòng)移液工作站中自動(dòng)化進(jìn)行并可同時(shí)處理多個(gè)檢材，操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，效率高。
為達(dá)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
本發(fā)明提供一種混合精斑提取工藝，所述混合精斑提取工藝包括：
對(duì)檢材進(jìn)行一次裂解，收集一次沉淀，對(duì)一次沉淀進(jìn)行二次裂解處理，收集二次沉淀，對(duì)二次沉淀進(jìn)行三次裂解，收集上清液，獲得含有男性DNA的溶液。
本發(fā)明的混合精斑提取工藝中，首先對(duì)檢材進(jìn)行兩次裂解消化女性成分，得到僅含有男性細(xì)胞的檢材，能夠縮短裂解處理周期并高效消化女性成分，避免殘留的女性成分對(duì)后續(xù)分析男性DNA的影響。
優(yōu)選地，所述混合精斑提取工藝在全自動(dòng)移液工作站中進(jìn)行。
本發(fā)明中，在全自動(dòng)移液工作站基礎(chǔ)上開發(fā)混合精斑提取工藝，從而實(shí)現(xiàn)在全自動(dòng)移液工作站中自動(dòng)化進(jìn)行混合精斑提取，可同時(shí)處理多個(gè)檢材，降低了操作難度，縮短了提取時(shí)間，提高了處理效率以及檢出純目標(biāo)男性的成功率，有利于快速偵破案件。
優(yōu)選地，所述混合精斑提取工藝還包括分別對(duì)一次沉淀和二次沉淀進(jìn)行清洗的步驟。
優(yōu)選地，所述清洗的清洗液包括Tris-Cl、氯化鈉和乙二胺四乙酸。
優(yōu)選地，所述Tris-Cl在所述清洗液中的濃度為90～110mM，包括但不限于91mM、92mM、93mM、94mM、100mM、102mM、104mM、106mM或108mM。
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