[發(fā)明專利]一種液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測生物小分子標(biāo)志物的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110156680.6
• 申請日: 2021-02-04
• 公開（公告）號: CN112730706A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈偉;袁角建;高江國;林景超
• 申請（專利權(quán)）人: 麥特繪譜生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 上海浙晟知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31345
• 代理人: 楊小雙

本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種高通量液相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測生物樣本中三甲胺、氧化三甲胺、膽堿、甜菜堿、肌酐、左旋肉堿和咪唑丙酸的方法。本發(fā)明方法能一次檢測血清、血漿和尿樣中的三甲胺、氧化三甲胺、膽堿、甜菜堿、肌酐、左旋肉堿、和咪唑丙酸7種物質(zhì)，比以往技術(shù)增加了三甲胺和咪唑丙酸。生物樣本前處理簡單，分析時(shí)間短，易于臨床推廣使用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測生物小分子標(biāo)志物的方法，屬于臨床生物樣本檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

心血管病(cardiovascular disease，CVD)嚴(yán)重威脅人類健康，目前在中國的患病率和死亡率都持續(xù)上升，患病人數(shù)約3.0億，其死亡率居各病因首位，占居民疾病死亡構(gòu)成的40％以上。隨著經(jīng)濟(jì)社會的發(fā)展，國民生活方式也發(fā)生了巨大改變，在居民不健康生活方式盛行的背景下，國民CVD危險(xiǎn)因素普遍暴露，致使對CVD早預(yù)防、早發(fā)現(xiàn)、早治療變的尤為重要。

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)體內(nèi)氧化三甲胺及其相關(guān)代謝物的含量水平是識別和治療CVD疾病進(jìn)程的重要指標(biāo)，準(zhǔn)確測定其含量有助于完善CVD風(fēng)險(xiǎn)評估體系，為臨床治療疾病提供重要依據(jù)。

目前，申請?zhí)枮?02010024358.3的中國專利公開了“液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測新型心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)志物的方法”，該發(fā)明公開了一種測定5種小分子(氧化三甲胺、膽堿、甜菜堿、肌酐和左旋肉堿)的液相串聯(lián)質(zhì)譜方法，但檢測物質(zhì)相對不全。申請?zhí)枮?01910274765.7的中國專利公開了“一種試劑盒”，該發(fā)明公開一種測定血漿的試劑盒，但僅測氧化三甲胺一種物質(zhì)。申請?zhí)枮?01811068542.7的中國專利公開了“一種測定小分子生物標(biāo)志物的方法”，該發(fā)明公開了“一種測定11種小分子物質(zhì)的液相串聯(lián)質(zhì)譜方法”，但樣本前處理復(fù)雜，不適合臨床推廣。申請?zhí)枮?01710502265.5的中國專利公開了“一種氧化三甲胺定量檢測試劑盒及方法”，該發(fā)明公開了一種測定氧化三甲胺的液相串聯(lián)質(zhì)譜方法，但僅測氧化三甲胺一種物質(zhì)。

綜上所述可知，關(guān)于心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)志物的檢測方法主要不足在于：

1、多數(shù)檢測方法檢測物質(zhì)種類不全，無法滿足臨床需要。

2、生物樣本前處理過程復(fù)雜，難以推廣到臨床應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種超高效液相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測生物樣本中的三甲胺、氧化三甲胺、膽堿、甜菜堿、肌酐、左旋肉堿和咪唑丙酸的方法。

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題采取以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

一種液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測生物小分子標(biāo)志物的方法，包括下列步驟：

步驟S1：標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

(a)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)標(biāo)液的配制

分別稱取氧化三甲胺，膽堿、肌酐、甜菜堿和左旋肉堿內(nèi)標(biāo)適量，用50％乙腈水溶液溶解，配制各內(nèi)標(biāo)儲備液，再用50％乙腈水溶液稀釋配制1-10μM的混合內(nèi)標(biāo)工作溶液；

(b)標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制

分別稱取氧化三甲胺、膽堿、甜菜堿、肌酐、左旋肉堿、和咪唑丙酸適量，用50％乙腈水溶液溶解，配制單標(biāo)標(biāo)品儲備溶液，其中三甲胺為已知濃度的儲備溶液，再使用50％乙腈水溶液配制上述7種物質(zhì)的混合標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液；

使用50％乙腈水溶液稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，使其濃度范圍分別為：TMA 0.098-25.0μg/mL，TMAO 0.019-12.5μM，Choline 0.019-12.5μM，Betaine 0.039-12.5μM，Creatinine 0.019-12.5μM，L-Carnitine 0.039-12.5μM，Imidazolepropionicacid 0.0195-1.5625μM；

(c)質(zhì)控品的配制