[發(fā)明專利]一株敲入Sic1基因的釀酒酵母基因工程菌及其構建方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110156473.0
• 申請日: 2021-02-04
• 公開（公告）號: CN113322194B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發(fā)明（設計）人: 應漢杰;蔣穎;陳勇;趙偉;朱家慶;張濤;梁偲策;余斌
• 申請（專利權）人: 南京工業(yè)大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/81;C12P7/06;C12R1/865
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 肖明芳

1.一種利用轉入Sic1基因的釀酒酵母基因工程菌發(fā)酵制備乙醇的方法，其特征在于，該菌株由向原始釀酒酵母轉入Sic1基因后改造得到，所述Sic1基因的核苷酸序列如SEQ?IDNO.1所示，所述原始釀酒酵母來源于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，菌株保藏編號：CICC?1308，通過固定化發(fā)酵制備乙醇。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)進行基因改造。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的釀酒酵母基因工程菌通過如下步驟構建得到：

（1）將Cas9質粒上gRNA?scaffold序列上的靶位點改為釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）?1308基因組上的靶位點，得到修改后的質粒；

（2）提取釀酒酵母（Saccharomyces?cerevisiae）1308的基因組；

（3）以步驟（2）得到的基因組DNA為模板，在靶位點的上下游各設置長度為500bp的同源臂且同源臂不包含此靶向序列；以上游同源臂、Sic1基因序列和下游同源臂為模板，通過重疊PCR擴增得到Sic1基因轉入組件；

（4）將步驟（1）和（3）得到的修改后的質粒和Sic1基因轉入組件轉化至原始釀酒酵母感受態(tài)中，即得Sic1基因轉入的釀酒酵母基因工程菌。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定化發(fā)酵以天然有機載體、人工合成高分子載體、人工無機高分子材料、復合材料作為固定化介質。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵的溫度為30℃-40℃。

6.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵的發(fā)酵培養(yǎng)基配方如下：55-110g/L葡萄糖，2-4?g/L蛋白胨、0.2-0.6?g/L硫酸銨、3-5?g/L磷酸二氫鉀、2-5?g/L酵母膏、0.2-0.6?g/L硫酸鎂、0.01-0.05?g/L七水合硫酸亞鐵、0.01-0.05g/L七水合硫酸鋅，溶劑為水。