[發(fā)明專利]合成α-熊果苷的枯草芽孢桿菌及其構(gòu)建方法與應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110156063.6 | 申請日： | 2021-02-04 |
| 公開（公告）號： | CN112795526B | 公開（公告）日： | 2023-02-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 劉龍;陳堅;呂雪芹;堵國成;李江華;劉延峰;周祺 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N9/10;C12N15/54;C12N15/75;C12P19/44;C12R1/125 |
| 代理公司： | 蘇州市中南偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 王玉仙 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 合成 熊果苷 枯草 芽孢 桿菌 及其 構(gòu)建 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種合成α-熊果苷的枯草芽孢桿菌，其特征在于，其是在枯草芽孢桿菌宿主中整合表達蔗糖磷酸化酶，并采用核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的RBS調(diào)控蔗糖磷酸化酶基因表達；
所述的蔗糖磷酸化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述的整合表達是在枯草芽孢桿菌宿主的
所述的枯草芽孢桿菌宿主為枯草芽孢桿菌WB800Δ
2.一種權(quán)利要求1所述的枯草芽孢桿菌的構(gòu)建方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1、構(gòu)建表達框：將蔗糖磷酸化酶基因連接到表達載體上，并插入SEQ ID NO. 1所述的RBS序列；
S2、整合表達：將S1步驟構(gòu)建的表達框整合至枯草芽孢桿菌宿主中，消除抗性得到所述的枯草芽孢桿菌；
所述的整合是將所述的表達框整合至枯草芽孢桿菌宿主的
3.權(quán)利要求1所述的枯草芽孢桿菌在全細胞催化合成α-熊果苷中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的應(yīng)用是將所述的枯草芽孢桿菌作為催化劑，在25-35℃催化蔗糖和對苯二酚反應(yīng)生產(chǎn)α-熊果苷。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，催化反應(yīng)的反應(yīng)液包括OD600=30-60的枯草芽孢桿菌細胞，300-450 g/L蔗糖，50-70 g/L 對苯二酚。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的枯草芽孢桿菌細胞是通過將所述的枯草芽孢桿菌接種至TB培養(yǎng)基中35-38℃培養(yǎng)10-15 h得到。
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