[發明專利]一種核酸提取用裂解結合液及其試劑盒和應用在審
| 申請號： | 202110153524.4 | 申請日： | 2021-02-04 |
| 公開（公告）號： | CN112899266A | 公開（公告）日： | 2021-06-04 |
| 發明（設計）人： | 陳江坡;馬蒙蒙;胖鐵良;孫杰;張志達;陳傳紅;王文軒 | 申請（專利權）人： | 北京中科醫學檢驗實驗室有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491 | 代理人： | 張國棟 |
| 地址： | 102299 北京市昌平區*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 核酸 提取 裂解 結合 及其 試劑盒 應用 | ||
1.一種核酸提取用裂解結合液，其特征在于，所述裂解結合液由以下物質組成：鹽酸胍，EDTA，tritonX-100，Tris-HCl，NP-40，CTAB，水。
2.根據權利要求1所述的核酸提取用裂解結合液，其特征在于，所述裂解結合液由以下物質組成：3-6M鹽酸胍，5-20mM EDTA，1-20％TritonX-100，0.1-1M Tris-HCl，0.5-2％NP-40，0.1-0.5％CTAB，余量為水。
3.根據權利要求1所述的核酸提取用裂解結合液，其特征在于，所述裂解結合液由以下物質組成：4M鹽酸胍，5mM EDTA，10％TritonX-100，0.7M Tris-HCl，1％NP-40，0.1％CTAB，余量為水。
4.根據權利要求1～3任意項所述的核酸提取用裂解結合液，其特征在于，所述裂解結合液還包括3％-8％磁珠。
5.權利要求1～4任意項所述的核酸提取用裂解結合液在制備核酸提取的試劑或試劑盒中的應用。
6.含有權利要求1～4任意項所述的核酸提取用裂解結合液的核酸提取試劑盒，其特征在于，所述核酸提取試劑盒包括蛋白酶k溶液、裂解結合液、洗滌緩沖液和洗脫緩沖液。
7.根據權利要求6所述的核酸提取試劑盒，其特征在于，洗滌緩沖液包括洗滌緩沖液1和洗滌緩沖液2，洗滌緩沖液1由以下組分組成：0.5-2M鹽酸胍，10mM Tris-HCl，0.1-1MNaCl，pH值6.0-6.5，30-60％乙醇溶液；洗滌緩沖液2為70-85％乙醇水溶液。
8.根據權利要求6或7所述的核酸提取試劑盒，其特征在于，洗脫緩沖液由以下組分組成：1-5mM EDTA，5-20mM Tris-HCl，pH值7.0-10。
9.使用權利要求6～8任意項核酸提取試劑盒提取核酸的提取方法，其特征在于，提取方法的具體步驟如下：
1)在生物樣品中加入裂解結合液和蛋白酶k溶液，在70-95℃裂解5-15min，生物樣品釋放出核酸，在裂解結合液下與磁珠結合，在外部磁場作用下，磁珠聚集，形成磁珠-核酸復合物，收集磁珠-核酸復合物；
2)向磁珠-核酸復合物中加入洗滌緩沖液，洗滌去除磁珠-核酸復合物上的雜質，在外部磁場作用下，收集洗滌后的磁珠-核酸復合物；
3)向洗滌后的磁珠-核酸復合物中加入洗脫緩沖液，65℃-85℃洗脫3-8min可將結合在磁珠上的核酸洗脫下來，即得到提取的核酸。
10.根據權利要求9所述的提取方法，其特征在于，所述生物樣品包括組織、細胞、血漿、血清、體液、拭子、病毒培養液或糞便。
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