[發明專利]一種誘變菌種以及從植物甾醇制備膽酸類化合物的方法

有效

• 申請號: 202110150455.1
• 申請日: 2021-02-03
• 公開（公告）號: CN112899191B
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發明（設計）人: 蔣紅平;唐杰;李斌;郭志軍
• 申請（專利權）人: 湖南醇康醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/01;C12P33/02;C12P33/00;C12P33/06;C12P39/00;C07J9/00;C12R1/32;C12R1/645
• 代理公司: 北京東國專利商標代理事務所(普通合伙) 11980
• 代理人: 董文國;任冠舉

本發明提供了一種從植物甾醇制備4?膽烯酸?3?酮的方法，將保藏編號為CCTCC M2020987的誘變菌種經培養后接種至轉化培養基，對式Ⅰ所示植物甾醇進行發酵轉化，得到式Ⅱ所示4?膽烯酸?3?酮。本發明提供了一種新的以植物甾醇為原料，通過生物發酵與化學合成相結合的手段，制備4?膽烯酸?3?酮、石膽酸、鵝去氧膽酸、7?酮石膽酸的方法，該方法未使用動物源提取，可以以工業廢水廢渣為原料，綠色環保；操作簡單，收率高，異構體雜質少，有機溶劑使用量少；通過本發明制備膽酸類化合物，反應試劑簡單易得，反應條件溫和，反應收率高，適合工業化大生產。

技術領域

本發明涉及化學制藥技術領域，尤其涉及一種誘變菌種以及從植物甾醇制備膽酸類化合物的方法，具體涉及以植物甾醇為原料通過生物發酵與化學合成相結合的方式制備膽酸類化合物的方法。

背景技術

膽汁酸是膽汁的重要成分，在脂肪代謝中起著重要作用。膽汁酸主要存在于腸肝循環系統并通過再循環起一定的保護作用。近年來，膽酸及其衍生物被發現了在治療和預防疾病方面有較大作用，因為很多膽酸及其衍生物是法尼醇X受體激動劑，因此會參與調節法尼醇X受體介導的病癥，比如肝臟、肺部、腎臟、心臟等疾病或者糖代謝、脂肪代謝、胰島素代謝等生物過程。

目前膽汁酸主要從生物體提取分離出來，近年來，人們也通過合成研究，實現了膽汁酸之間的相互轉變，比如從豬去氧膽酸合成石膽酸(LCA)、鵝去氧膽酸(CDCA)和熊去氧膽酸(UDCA)，從膽酸、鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸和去氧膽酸等合成石膽酸，從鵝去氧膽酸合成7-酮石膽酸(7-KLCA)進一步合成熊去氧膽酸或者奧貝膽酸等，一方面由于提取的膽酸類化合物來源畢竟有限，另一方面從生物體提取的膽酸類化合物可能含有不可知的污染物，人們也開始研究以植物原料為來源合成膽酸類化合物，但始終由于技術原因還處于小規模研發階段。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供一種誘變菌種以及從植物甾醇制備膽酸類化合物的方法，該方法反應條件溫和，反應收率高，適合工業化大生產。

為達到上述目的，本發明提供了一種分支桿菌Mycobacterium sp.NRRL B-3805的誘變菌種，保藏編號為CCTCC M2020987。

該菌種由分支桿菌NRRL B-3805為出發菌種，經誘變得到。

上述原始菌種的來源為美國農業研究菌種保藏中心。

本發明提供了用于生產4-膽烯酸-3-酮的分支桿菌誘變菌種的誘變方法，包括以下步驟：

以分支桿菌NRRL B-3805為出發菌種，經過斜面培養和二級種子培養，收集菌體制備菌懸液，加入亞硝基胍進行誘變處理，將誘變后的菌懸液稀釋后涂布于固體平板培養基上，挑選單菌落進行植物甾醇發酵，檢測4-膽烯酸-3-酮的產量，得到能產生4-膽烯酸-3-酮的目標誘變菌種，并分離保存菌株。

本發明優選的，所述斜面培養的培養基配方為：酵母膏粉10～20g/L，更優選10g/L；葡萄糖15～30g/L，更優選15g/L；硝酸鈉2～6g/L，更優選5.4g/L；磷酸氫二銨0.1～1g/L，更優選0.6g/L；瓊脂粉20g/L,pH＝7.5。

本發明優選的，所述種子培養的培養基配方為：酵母膏粉10～20g/L，更優選10g/L；葡萄糖15～30g/L，更優選15g/L；硝酸鈉2～6g/L，更優選5.4g/L；磷酸氫二銨0.1～1g/L，更優選0.6g/L，pH＝7.5。

本發明優選的，所述固體培養基的配方為：酵母膏粉10～20g/L，更優選10g/L，葡萄糖15～30g/L，更優選15g/L；硝酸鈉2～6g/L，更優選5.4g/L；磷酸氫二銨0.1～1g/L，更優選0.6g/L；瓊脂粉20g/L，pH＝7.5。

所述誘變處理的時間優選為30min。