[發明專利]一種誘變菌種以及從植物甾醇制備膽酸類化合物的方法有效
| 申請號： | 202110150455.1 | 申請日： | 2021-02-03 |
| 公開（公告）號： | CN112899191B | 公開（公告）日： | 2022-09-02 |
| 發明（設計）人： | 蔣紅平;唐杰;李斌;郭志軍 | 申請（專利權）人： | 湖南醇康醫藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N15/01;C12P33/02;C12P33/00;C12P33/06;C12P39/00;C07J9/00;C12R1/32;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京東國專利商標代理事務所(普通合伙) 11980 | 代理人： | 董文國;任冠舉 |
| 地址： | 410000 湖南省長沙市高新開*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 誘變 菌種 以及 植物 制備 膽酸 化合物 方法 | ||
1.分支桿菌Mycobacterium sp.NRRL B-3805的誘變菌種，保藏編號為CCTCCM2020987。
2.權利要求1所述的保藏編號為CCTCC M2020987的誘變菌種在制備4-膽烯酸-3-酮、石膽酸、鵝去氧膽酸或7-酮石膽酸中的應用。
3.一種從植物甾醇制備4-膽烯酸-3-酮的方法，其特征在于，將權利要求1所述的保藏編號為CCTCC M2020987的誘變菌種經培養后接種至轉化培養基，對式Ⅰ所示植物甾醇進行發酵轉化，得到式Ⅱ所示4-膽烯酸-3-酮；
其中，R為-(CH2)3CH(C2H5)CH(CH3)2、-CH2CH＝CHCH(C2H5)CH(CH3)2、-(CH2)3CH(CH3)CH(CH3)2或-CH2CH＝CHCH(CH3)CH(CH3)2。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述發酵轉化方法為：將權利要求1所述的保藏編號為CCTCC M2020987的誘變菌種經一級種子培養和二級種子培養后加入轉化培養基中，接種量1％～30％，溫度20-30℃，轉速200～500rpm，空氣流量0.1～0.5Nm3/h，壓力0.01～0.1MPa，轉化時間為96～144h。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述一級種子培養和二級種子培養的培養基配方為：酵母膏粉10～20g/L，葡萄糖15～30g/L,硝酸鈉2～6g/L，磷酸氫二銨0.1～1g/L，pH＝7.5；
所述轉化培養基配方為：植物甾醇10～40g/L，大豆油80～200g/L，玉米漿10～100g/L，硝酸鈉2～6g/L，磷酸氫二銨0.1～1g/L，調pH＝8.0。
6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，發酵轉化后，進行后處理，得到式Ⅱ所示4-膽烯酸-3-酮；
所述后處理具體為：
調節體系pH值為5.0-6.0，加熱攪拌后，靜止分層；取油層用甲醇進行提取，濃縮除去溶劑后，用乙酸乙酯回流打漿，冷卻析出固體后過濾；濾液濃縮除去溶劑，用氯仿和水，在pH12-13的條件下，常溫攪拌、靜置分層；取水相調節pH至1.0，靜置分層；取分層后得到的油狀物，為式Ⅱ所示4-膽烯酸-3-酮。
7.一種從植物甾醇制備石膽酸的方法，包括以下步驟：
A)將權利要求1所述的保藏編號為CCTCC M2020987的誘變菌種經培養后接種至轉化培養基，對式Ⅰ所示植物甾醇進行發酵轉化，得到式Ⅱ所示4-膽烯酸-3-酮；
B)將上述4-膽烯酸-3-酮進行加氫反應和還原反應，得到式Ⅲ所示石膽酸；
其中，R為-(CH2)3CH(C2H5)CH(CH3)2、-CH2CH＝CHCH(C2H5)CH(CH3)2、-(CH2)3CH(CH3)CH(CH3)2或-CH2CH＝CHCH(CH3)CH(CH3)2。
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