[發明專利]一種SM03單抗的活性檢測方法及其在SM03單抗質量監控中的應用

在審

• 申請號: 202110147953.0
• 申請日: 2021-02-03
• 公開（公告）號: CN112816709A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 宋南;黃健樂;張嘉華
• 申請（專利權）人: 杏聯藥業（蘇州）有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C12Q1/18
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種SM03單抗的活性檢測方法及其在SM03單抗質量監控中的應用。所述方法包括如下步驟：包括如下步驟：將SM03單抗固定在酶標板上，孵育；然后加入含抗IgM抗體的B淋巴瘤細胞懸液，孵育；再通過檢測孵育后B淋巴瘤細胞的存活率評價SM03單抗活性。通過實驗證明：本發明的SM03單抗活性檢測方法穩定且靈敏度高，適用于對SM03單抗的質量控制，可用于評估SM03單抗產品在體內療效是否達到預期。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種SM03單抗的活性檢測方法及其在SM03單抗質量監控中的應用。

背景技術

人CD22是在成熟IgD+IgM+B細胞上表達的一種糖蛋白，是一種防止免疫系統過 激反應或自身免疫疾病的調節分子。它的胞外結構由七個免疫球蛋白樣的結構域組成， 細胞內結構由三個免疫受體酪氨酸抑制結構域組成。CD22分子可以壓抑B細胞受體 (B cellreceptor，BCR)信號，避免B細胞被抗原過度激活導致免疫調控失衡。已有 實驗證據表明，CD22基因敲除小鼠體內的B細胞處于過度激活狀態，在I型膠原誘 導下，關節炎癥狀的表現也比野生型小鼠更嚴重。CD22基因敲除所導致的BCR信號 過強還會導致邊緣區B細胞(Marginal Zone B cells)發育異常，而該B細胞群體的發 育嚴重依賴于弱BCR信號強度。

目前，CD22如何從分子生物學層面來抑制BCR活性還未被清楚揭示。 Epratuzumab是目前機制研究較為充分的抗CD22單抗之一。Epratuzumab可能通過胞 啃作用、破壞B細胞和內皮細胞的相互接觸或調節CD22下游信號通路來實現抑制B 細胞免疫的目的。然而上述發現涉及到的有關研究方法，因為其步驟繁雜可重復性差， 均不適合抗CD22抗體在日常生產中的質量控制。迄今為止還未有抗CD22單抗產品 被成功商業化，因此還未有可用于抗CD22單抗活性質量控制的檢測方法的相關報導。

SM03是由鼠源抗體RFB4衍生的一種抗CD22嵌合抗體，并已在非何氏淋巴瘤的 治療上進入臨床試驗階段。SM03單抗的結合表位不同于Epratuzumab抗體，其對B 細胞的免疫抑制作用也更強。由于SM03單抗以成熟B細胞為目標并抑制其功能，這 一單抗產品應用已擴展到其它自身免疫疾病適應癥的治療，尤其是類風濕性關節炎 (RA)和系統性紅斑狼瘡(SLE)。SM03單抗的生產過程需要一種基于細胞的活性測 定方法(cell-based assay)來確保產品質量的均一性。然而由于作用機理的差異，借鑒 其他針對B細胞淋巴瘤已商業化抗體如Rituximab的活性測定方法并不可行。

Rituximab是通過抗體的FC片段和自然殺傷細胞(Natural Killer Cells，NK)表面 的FC受體相結合并引導其對靶細胞產生殺傷(抗體依賴的細胞殺傷作用，antibodydependent cell cytotoxicity，ADCC)，或者通過FC片段募集血清中的補體攻擊靶細胞(補體依賴的細胞殺傷作用，complement dependent cytotoxicity，CDC)。然而由于SM03在結合CD22分子后會被靶細胞迅速內吞，因此SM03并不依賴補體或其他免疫細胞 對靶細胞形成殺傷。所以適用于Rituximab的體外ADCC和CDC檢測方法對SM03 產品質量控制不適用。

綜上所述，目前尚缺乏一種穩定可靠易操作的基于細胞的活性檢測方法用于SM03的產品質量控制。

發明內容

本發明的目的是提供一種穩定、可靠、易操作的基于細胞的SM03單抗活性檢測 方法及其在SM03單抗產品的質量檢測或監控中的應用。

為了實現上述目的，本發明首先提供了一種SM03單抗活性的檢測方法。

本發明提供的SM03單抗活性的檢測方法包括如下步驟：通過測量SM03單抗在 體外培養環境下對B淋巴瘤細胞的殺傷效果實現SM03單抗活性的檢測。