[發明專利]一種SM03單抗的活性檢測方法及其在SM03單抗質量監控中的應用

在審

• 申請號: 202110147953.0
• 申請日: 2021-02-03
• 公開（公告）號: CN112816709A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 宋南;黃健樂;張嘉華
• 申請（專利權）人: 杏聯藥業（蘇州）有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C12Q1/18
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種SM03單抗活性的檢測方法，包括如下步驟：通過測量SM03單抗在體外培養環境下對B淋巴瘤細胞的殺傷效果實現SM03單抗活性的檢測。

2.根據權利要求1所述的方法，所述方法包括如下步驟：將SM03單抗固定在酶標板上，孵育；然后加入含抗IgM抗體的B淋巴瘤細胞懸液，孵育；再通過檢測孵育后B淋巴瘤細胞的存活率實現SM03單抗活性的檢測。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述B淋巴瘤細胞為Ramos細胞或Daudi細胞。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述抗IgM抗體為羊抗人IgM抗體。

5.根據權利要求2-4任一所述的方法，其特征在于：所述檢測孵育后B淋巴瘤細胞的存活率的試劑為Celltiter Glo試劑。

6.根據權利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：

1)將可吸附抗體的材料包被至酶標板上，洗滌；

2)將不同濃度梯度的SM03單抗溶液分別加入至步驟1)得到的酶標板中，孵育，洗滌；

3)將含抗IgM抗體的Ramos細胞懸液加入至步驟2)得到的酶標板中，孵育；

4)將Celltiter Glo試劑加入至步驟3)得到的酶標板中，震蕩均勻后讀取各孔的熒光值，并計算出各孔的相對熒光強度值；以SM03單抗濃度的對數值為橫坐標，以相對熒光強度值為縱坐標，擬合四參數曲線，獲得IC₅₀值，并根據IC₅₀值評價SM03單抗活性。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述1)中，所述可吸附抗體的材料為Protein A或Protein G或Protein L；

和/或，所述1)中，所述洗滌為用PBST進行洗滌；

和/或，所述1)中，所述洗滌的次數為3次；

和/或，所述2)中，所述不同濃度梯度的SM03單抗溶液的濃度分別為15000ng/mL、10000ng/mL、6667ng/mL、4444ng/mL、2963ng/mL、1975ng/mL、1317ng/mL、878ng/mL、585ng/mL、390ng/mL和260ng/mL；

和/或，所述2)中，所述SM03單抗溶液的加入量為100μL/孔；

和/或，所述2)中，所述洗滌為用PBS進行洗滌；

和/或，所述2)中，所述洗滌的次數為3次；

和/或，所述2)中，所述孵育的條件為室溫孵育30min；

和/或，所述3)中，所述含抗IgM抗體的Ramos細胞懸液的細胞濃度為4×10⁵/mL；

和/或，所述3)中，所述抗IgM抗體的濃度為1μg/mL；

和/或，所述3)中，所述含抗IgM抗體的Ramos細胞懸液的加入量為100μL/孔；

和/或，所述3)中，所述孵育的條件為37℃、5％CO₂培養箱中孵育72h；

和/或，所述4)中，所述Celltiter Glo試劑的加入量為100μL/孔；

和/或，所述4)中，所述相對熒光強度值的計算方法為采用酶標儀讀取各孔的熒光值，然后將各孔的熒光值減去對照孔的熒光值，得到各孔的相對熒光強度值；所述對照孔為將步驟2)中的SM03單抗溶液替換為抗體稀釋液后得到的孔。

8.權利要求1-7任一所述的方法在SM03單抗質量檢測或監控中的應用。

9.一種SM03單抗的質量檢測或監控方法，包括如下步驟：按照權利要求1-7任一所述的方法獲得SM03單抗的IC₅₀值，并根據IC₅₀值評價SM03單抗質量：若SM03單抗的IC₅₀值為900ng/mL-1700ng/mL，則所述SM03單抗質量合格，若SM03單抗IC₅₀值不為900ng/mL-1700ng/mL，則SM03單抗質量不合格。

10.一種產品，其包括抗IgM抗體和B淋巴瘤細胞；

所述產品的功能為如下a1)或a2)：

a1)SM03單抗的活性檢測；

a2)SM03單抗的質量檢測或監控。