[發明專利]一種以腺病毒為載體的冠狀病毒疫苗及其制備方法有效
| 申請號： | 202110144105.4 | 申請日： | 2021-02-02 |
| 公開（公告）號： | CN113248577B | 公開（公告）日： | 2022-10-21 |
| 發明（設計）人： | 高強;鄭澤宇;吳慕勝;王治偉;呂哲 | 申請（專利權）人： | 北京科興中維生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/165 | 分類號： | C07K14/165;C12N15/50;C12N15/861;C12N5/10;A61K39/215;A61K39/39;A61P31/14;A61P11/00;A61P13/12;A61P1/00;A61P9/04 |
| 代理公司： | 北京睿陽聯合知識產權代理有限公司 11758 | 代理人： | 郭奧博;張穎 |
| 地址： | 100085 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 病毒 載體 冠狀病毒 疫苗 及其 制備 方法 | ||
1.以腺病毒為載體的冠狀病毒疫苗的目的氨基酸序列，其特征在于，如SEQ1、SEQ2、SEQ3、SEQ4、SEQ5所示的氨基酸序列中的任意一種。
2.以腺病毒為載體的冠狀病毒疫苗的目的基因序列，其特征在于，編碼SEQ1、SEQ2、SEQ3、SEQ4、SEQ5的氨基酸序列的DNA序列中的任意一種。
3.根據權利要求2所述的目的基因序列，其特征在于，所述目的基因序列是經過密碼子優化后的DNA序列。
4.包含權利要求2或3所述目的基因序列的腺病毒載體。
5.根據權利要求4所述的腺病毒載體，其特征在于，所述腺病毒載體包括：包含所述目的基因序列的腺病毒穿梭質粒以及腺病毒骨架質粒。
6.根據權利要求4所述的腺病毒載體，其特征在于，所述腺病毒載體包括：包含所述目的基因序列的AdMax腺病毒系統穿梭質粒以及AdMax腺病毒系統骨架質粒。
7.表達權利要求1所述氨基酸序列的細胞，所述細胞中外源轉入了權利要求4～6任意一項所述腺病毒載體。
8.根據權利要求7所述的細胞，其特征在于，所述細胞為整合腺病毒E1基因的細胞。
9.根據權利要求8所述的細胞，其特征在于，所述細胞為HEK-293細胞或HEK-293A細胞。
10.以腺病毒為載體的冠狀病毒疫苗，其包含SEQ1、SEQ2、SEQ3、SEQ4、SEQ5的氨基酸序列中的任意一種。
11.根據權利要求10所述的冠狀病毒疫苗，其特征在于，所述疫苗中還含有免疫佐劑。
12.根據權利要求11所述的冠狀病毒疫苗，其特征在于，所述免疫佐劑為氫氧化鋁佐劑。
13.根據權利要求10～12任意一項所述的冠狀病毒疫苗，其特征在于，所述疫苗為液體疫苗。
14.根據權利要求13所述的冠狀病毒疫苗，其特征在于，所述疫苗為肌肉內液體注射劑、靜脈內液體注射劑、鼻腔內液體注射劑、皮內液體注射劑或皮下液體注射劑。
15.以腺病毒為載體的冠狀病毒疫苗的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將權利要求4～6任意一項所述腺病毒載體轉染入細胞，進行細胞培養，收獲含有病毒的培養液。
16.根據權利要求15所述的制備方法，其特征在于，將轉染后的細胞培養至出毒，將病毒從細胞中充分釋放后，收集上清液，得第一代毒種；用所述第一代毒種感染細胞，收獲含有病毒的培養液。
17.根據權利要求15所述的方法，其特征在于，所述細胞為整合腺病毒E1基因的細胞。
18.根據權利要求17所述的方法，其特征在于，所述細胞為HEK-293細胞或HEK-293A細胞。
19.根據權利要求15～18任意一項所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：對所述含有病毒的培養液進行純化。
20.根據權利要求19所述的制備方法，其特征在于，所述純化包括如下步驟：(1)加入核酸內切酶消化核酸物質；(2)密度梯度離心；(3)凝膠排阻層析。
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