[發明專利]一種高谷氨酸驢膠原活性肽的應用

有效

• 申請號: 202110143314.7
• 申請日: 2021-02-02
• 公開（公告）號: CN112812175B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發明（設計）人: 成向榮;曹叢叢;管玲娟;毛嘉敏;程昱瑤;馬家輝
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C12P21/06;C07K1/16;C07K1/34;C07K1/36;C07K1/14;A23L33/18;A23L33/165;A23L2/52;A23K20/147;A23K20/24;A23K20/20;A61K38/01;A61P7/06
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種驢膠原蛋白肽，其特征在于，在所述驢膠原蛋白肽中，相對于甘氨酸，谷氨酸的含量為50～75％，相對分子質量為180～2000Da的肽占總驢膠原蛋白肽含量的70％以上，肽含量為95～99％；所述驢膠原蛋白肽的制備方法為：

(1)酶解消化：選用驢源性膠原蛋白，采用復合酶解技術進行體外消化，滅酶，離心后取上清液即為膠原多肽酶解液；當所述復合酶為木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶時，采用分步酶解：酶解底物的濃度為5～10％，先向酶解體系中加入終濃度為1000～5000U/mL的木瓜蛋白酶，保持pH為7.0～9.0、溫度40～60℃，酶解2～4h，再向酶解體系中加入終濃度為500～3000U/mL的堿性蛋白酶，保持pH為9.0～12.0、溫度40～60℃，酶解2～4h；

當所述復合酶為胃蛋白酶和胰蛋白酶時，采用分步酶解：酶解底物的濃度為5～10％，向酶解體系中加入終濃度為1000～3000U/mL的胃蛋白酶，保持pH為2.5～3.5、溫度30～40℃，酶解2～4h，再向酶解體系中加入終濃度為300～600U/mL的胰蛋白酶，保持pH為6.0～8.0、溫度30～40℃，酶解2～4h；

當所述酶為中性蛋白酶和堿性蛋白酶時，采用分步酶解：酶解底物的濃度為5～10％，向酶解體系中加入終濃度為1000～3000U/mL的中性蛋白酶，保持pH為6.0～8.0、溫度40～50℃，酶解2～4h，再向酶解體系中加入終濃度為2000～4000U/mL的堿性蛋白酶，保持pH為8.0～10.0、溫度40～50℃，酶解2～4h；

(2)分離制備：將膠原多肽酶解液經過利用固定化金屬親和層析經洗脫液洗脫，分離出不同吸附強度的組分，收集吸附力強的肽組分，納濾濃縮脫鹽、冷凍干燥得到高谷氨酸驢膠原蛋白肽；所述固定化金屬親和層析中，使用40％～80％的二甲基亞砜為洗滌劑，環氧氯丙烷為活化劑，亞氨基二乙酸為接枝配基；所述洗脫液洗脫的步驟為：先用緩沖液A：0.05-0.1mol/L乙酸鈉，0.05-0.1mol/L?NaCl洗脫至基線平穩，然后用緩沖液B：0.02-0.1mol/L磷酸氫二鈉、0.05-0.1mol/LNaCl洗脫強親和能力的部分，即為吸附力強的肽組分。

2.如權利要求1所述的驢膠原蛋白肽，其特征在于，步驟(2)的固定化金屬親和層析中，使用40％～80％的二甲基亞砜為洗滌劑，環氧氯丙烷為活化劑，活化溫度為30～60℃，活化時間2～4h；亞氨基二乙酸為接枝配基，接枝溫度50～70℃，時間8～16h。