[發明專利]一種過表達SMAD3誘導體細胞重編程為乳腺上皮細胞的方法

有效

• 申請號: 202110143147.6
• 申請日: 2021-02-02
• 公開（公告）號: CN112831473B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 黃奔;張丹丹;吳玉蓮;劉權輝;朱少倩;胡吉剛
• 申請（專利權）人: 廣西大學;廣西犇彭生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C12N15/12
• 代理公司: 天津企興智財知識產權代理有限公司 12226
• 代理人: 馬倩倩

本發明提供了一種過表達SMAD3誘導體細胞重編程為乳腺上皮細胞的方法，可應用于高效精準的調控體內特定組織細胞重編程為乳腺上皮細胞，有利于體內乳腺再生與修復。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種通過過表達SMAD3基因，誘導體細胞轉分化為乳腺上皮細胞的方法。

背景技術

我們課題組已經建立了小分子化合物誘導體細胞重編程為乳腺上皮細胞的技術體系。該體系能夠在使用一個小分子化合物的條件下誘導體細胞重編程為乳腺上皮細胞，誘導時間短，誘導效率高。通過小分子化合物等方法來抑制體細胞TGFbetaR1的表達都可以得到這一重編程現象，從而獲得誘導乳腺上皮細胞。

目前應用于體細胞重編程為乳腺上皮細胞的有效方法有限，小分子化合物的設計可能不利于原位定點的誘導體細胞重編程為乳腺上皮細胞，體內誘導可控性相對較低，可能具有一定的潛在副作用。

因此，需要多樣化的調控體內細胞重編程為乳腺上皮細胞的方法手段，為快速獲得純凈的乳腺上皮細胞提供多種可供選擇的技術和研究路徑。

發明內容

本發明旨在提出一種利用過表達SMAD3基因誘導體細胞重編程為乳腺上皮細胞的方法，可應用于高效精準的調控體內特定組織細胞重編程為乳腺上皮細胞，有利于體內乳腺再生與修復。

本發明首先提供了SMAD3基因在誘導體細胞重編程為乳腺上皮細胞方面的用途。具體應用方法為使SMAD3基因過表達。

所述體細胞來源于哺乳動物，包括人、小鼠、大鼠、兔、豬、羊、山羊、牛或水牛；所述體細胞優選為成纖維細胞或表皮細胞。

使所述SMAD3基因過表達的方式有很多，包括但不限于：(1)構建SMAD3慢病毒載體并轉染體細胞，或者，(2)使用小分子物質提高SMAD3的表達量，等，其中，用于提高SMAD3表達量的小分子物質可以為各類已知的小分子肽、mRNA、激酶等。

誘導所述體細胞重編程為乳腺上皮細胞的誘導培養基可以優選為：包括基礎液、KSR、非必需氨基酸、β-巰基乙醇、小分子化合物，各組分體積比為78:20:1:1：(0～1)；更優選的，所述基礎液為N2B27，包括Knockout DMEM/F12、N2(100×)、Neurobasal、B27(50×)、Glutamine(100×)；且組分體積比為99:1:97:2:1。其中，所述小分子化合物為VPA、Forskolin、Tranylcypromine、TTNPB、Repsox、SB431542、SB525334、LDN193189中的一種或兩種以上。

本發明還提供了一種誘導體細胞重編程為乳腺上皮細胞的方法，包括下述步驟：(1)構建過表達SMAD3慢病毒載體；(2)使過表達SMAD3慢病毒載體轉染體細胞；(3)使用誘導培養基誘導轉染后的體細胞重編程為乳腺上皮細胞。

本發明提供的方法拓展了利用一個關鍵基因誘導體細胞向乳腺上皮細胞轉分化的技術路線，為體內精準定位治療乳腺相關疾病以及乳腺組織重構再生提供了新的技術手段和研究方向。本發明通過過表達SMAD3基因能夠在4-8天內將體細胞尤其是成纖維細胞誘導重編程為乳腺上皮細胞，重編程誘導效率可達約3％。

附圖說明

構成本發明的一部分的附圖用來提供對本發明的進一步理解，本發明的示意性實施例及其說明用于解釋本發明，并不構成對本發明的不當限定。在附圖中：

圖1：過表達SMAD3誘導成纖維細胞轉分化為乳腺上皮細胞的形態。a,陰性對照組，感染空載誘導八天的細胞形態，未形成乳腺上皮細胞；b,實驗組，過表達SMAD3誘導成纖維細胞八天形成的乳腺上皮細胞。標尺，100um。