[發明專利]表達PD-L1分子的間充質干細胞來源外泌體及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202110143129.8
• 申請日: 2021-02-02
• 公開（公告）號: CN112921003A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 汪超;許方
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;A61K35/28;A61K38/17;A61P29/00
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

本發明公開一種表達PD?L1分子的間充質干細胞來源外泌體及其制備方法與應用。本發明利用間充質干細胞對機體的免疫調控功能及PD?1/PD?L1信號通路在免疫應答中的抑制作用，通過病毒轉染技術介導PD?L1分子在間充質干細胞內持續過表達，以使分泌的外泌體攜帶PD?L1分子，這種基因工程化的外泌體不僅保持間充質干細胞的免疫調控功能，而且能夠通過與免疫細胞表面的PD?1分子作用負調控免疫應答，從而有效治療免疫炎性疾病。本發明的PD?L1分子表達的間充質干細胞來源外泌體制備工藝簡單成熟，生物相容性好，免疫抑制效果顯著，可作為免疫疾病新型治療制劑，具有重要的研究價值和廣闊的應用前景。

技術領域

本發明涉及一種表達PD-L1分子的間充質干細胞來源外泌體及其制備方法與應用，屬于生物材料技術領域。

背景技術

炎癥是人體非常重要的防御反應，它可以限制炎癥擴散、清除壞死組織、恢復器官功能；但它還對人體有一定的危害性，當炎癥引起細胞發生嚴重的變性和壞死時，會影響受累組織和器官的功能，炎癥作為一把雙刃劍，它既能保護我們的身體免受病原體感染，又是諸多疾病的罪魁禍首。炎癥疾病發病率高，病情遷延，嚴重影響患者的生活質量，自身免疫病的治療主要包括兩個目標，第一是癥狀緩解和功能維持，第二是延緩組織損害進程。現有的藥物多是抑制多種細胞因子分泌、阻止炎癥細胞向炎癥部位聚集，抑制T、B淋巴細胞增殖和分泌，需長時間連續用藥方可獲得比較穩定的療效。炎癥細胞因子、細胞表面分子及其介導的信號通路參與免疫細胞功能紊亂和自身免疫病的病理進程，以細胞因子、受體和信號分子為治療靶點的生物制劑近年來獲得較快發展，但是很多藥物只能治標，不能治本，不能控制疾病的活動及進展，而且具有很強的不良反應，如中樞神經系統癥狀、心血管損害、胃腸道癥狀、造血系統改變、肝腎功能不全等。因此，亟需開辟新的有效且毒副作用小的免疫疾病治療方法。

間充質干細胞(MSCs)作為一類多能干細胞，不僅具有強大的增殖能力和多向分化潛能，還具有免疫調節功能，通過細胞間的相互作用及產生細胞因子發揮免疫重建作用；而且間充質干細胞來源方便，易于分離、培養、擴增和純化，不存在免疫排斥的特性，由于間充質干細胞具備的這些優點使其具有廣闊的臨床應用前景，臨床上一些難治性疾病，如系統性紅斑狼瘡、系統性硬化癥、糖尿病、肝硬化、類風濕關節炎等，根據初步的臨床報告數據顯示，間充質干細胞對這些疾病的治療取得顯著性療效。間充質干細胞還是非常理想的基因治療細胞載體，易被臨床上普遍應用的病毒載體系統所轉染，間充質干細胞特殊的生物學特性和基因治療二者協同作用擴大疾病治療范圍。然而間充質干細胞在應用過程中逐漸暴露了很多缺點，如間充質干細胞移植到宿主體內后不可控的分化或生長，產生的肺栓塞危害以及移植率、存活率低等問題，而且很多研究表明間充質干細胞發揮疾病治療的作用可能是通過分泌外泌體并攜帶間充質干細胞的活性物質實現的。外泌體作為無細胞治療的一種工具，不但具備間充質干細胞移植療效，而且減低了移植風險，在現代醫學領域具有不可估量的應用價值。

為避免過度活躍的免疫應答導致過度的炎癥反應和自身免疫性疾病，人體進化出免疫檢查點機制來控制免疫反應的強度和持續時間，最大限度地減少免疫應答對健康組織的損害。其中PD-1/PD-L1通路在抑制免疫應答的初始與效應階段、維持機體的免疫自穩中扮演重要角色；而且，通過阻斷PD-1/PD-L1信號通路增強腫瘤免疫應答的過程中引起機體其他的炎癥副作用，可累及各器官。利用PD-1/PD-L1通路負面調節免疫反應的能力治療免疫炎性疾病具有潛在的臨床意義。

目前關于間充質干細胞來源外泌體與PD-L1基因治療相結合在免疫炎性疾病的研究還未見報道。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供一種表達PD-L1分子的間充質干細胞來源外泌體，具有顯著的免疫抑制作用，生物相容性好，制備工藝簡單成熟，可用作炎癥治療制劑，該制劑可有效作用在炎癥部位，通過抑制炎癥部位炎性細胞浸潤和細胞因子分泌，在炎癥治療中呈現顯著的療效。

本發明的第一個目的是提供一種表達PD-L1分子的間充質干細胞來源外泌體，采用病毒介導間充質干細胞表達PD-L1分子，表達PD-L1分子的間充質干細胞分泌得到所述的外泌體。