[發(fā)明專利]表達(dá)PD-L1分子的間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體及其制備方法與應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110143129.8
• 申請(qǐng)日: 2021-02-02
• 公開（公告）號(hào): CN112921003A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 汪超;許方
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/867;A61K35/28;A61K38/17;A61P29/00
• 代理公司: 蘇州市中南偉業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

1.一種表達(dá)PD-L1分子的間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體，其特征在于，采用病毒介導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)PD-L1分子，表達(dá)PD-L1分子的間充質(zhì)干細(xì)胞分泌得到所述的外泌體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的表達(dá)PD-L1分子的間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體，其特征在于，所述的外泌體粒徑為80～120nm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的表達(dá)PD-L1分子的間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體，其特征在于，所述的外泌體通過靜脈注射方式進(jìn)行給藥。

4.一種權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的表達(dá)PD-L1分子的間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)；采用病毒介導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)PD-L1分子；提取表達(dá)PD-L1分子的間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的外泌體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述的方法具體包括如下步驟：

(1)分離純化得到間充質(zhì)干細(xì)胞；

(2)利用載有PD-L1質(zhì)粒的慢病毒轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞，并篩選獲得表達(dá)PD-L1分子的間充質(zhì)干細(xì)胞；

(3)將表達(dá)PD-L1分子的間充質(zhì)干細(xì)胞置于無血清的低糖DMEM中培養(yǎng)20～30h，收集培養(yǎng)液上清，通過差速和高速離心獲得表達(dá)PD-L1的間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述的差速和高速離心是依次進(jìn)行如下離心：250～350g離心5～15min，1500～2500g離心5～15min，8000～12000g離心20～40min，80000～120000g離心60～80min。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，在步驟(2)中，篩選是通過6～8μg/ml的嘌呤霉素進(jìn)行篩選。

8.一種炎癥治療制劑，其特征在于，包括權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的表達(dá)PD-L1分子的間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的炎癥治療制劑，其特征在于，所述的炎癥為慢性炎癥和/或急性炎癥。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的炎癥治療制劑，其特征在于，炎癥治療制劑的給藥方式為靜脈注射。