[發(fā)明專利]m6

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110140342.3
• 申請日: 2021-02-02
• 公開（公告）號: CN113652491A
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張文娟;林輝;張文姬;賴彩云;吳帆;彭欣悅;余素素;張露云;周鋮
• 申請（專利權(quán)）人: 暨南大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;G01N33/68;G01N33/573
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

1.m⁶A RNA甲基化含量及其甲基化相關(guān)酶和結(jié)合蛋白在制備衰老檢測試劑盒中的應(yīng)用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，

所述衰老檢測試劑盒是通過檢測m⁶A RNA甲基化含量、RNA甲基化相關(guān)酶及結(jié)合蛋白的蛋白表達量，將其作為標(biāo)志物判斷細胞衰老；

所述衰老包括復(fù)制性衰老和氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的早衰；

所述細胞是隨年齡增加而逐漸衰老的細胞；

所述RNA甲基化相關(guān)酶包括RNA甲基化酶和RNA去甲基化酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，

所述細胞為人胚肺成纖維細胞；

所述RNA甲基化酶為METTL3、METTL14、WTAP和KIAA1429；

所述RNA去甲基化酶為FTO和ALKBH5；

所述RNA甲基化結(jié)合蛋白為YTHDC1、YTHDF1和YTHDF2。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，當(dāng)檢測到細胞中m⁶A RNA甲基化含量降低，和/或m⁶A RNA甲基化酶METTL14、WTAP和KIAA1429，m⁶A RNA去甲基化酶FTO和ALKBH5以及m⁶ARNA甲基化結(jié)合蛋白YTHDC1、YTHDF1和YTHDF2中的一種或至少兩種低表達，和/或RNA甲基化酶METTL3高表達或低表達，表明細胞進入衰老狀態(tài)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，當(dāng)檢測到細胞中所述RNA甲基化酶METTL3低表達時，表明細胞復(fù)制性衰老；當(dāng)檢測到細胞中所述RNA甲基化酶METTL3高表達時，表明細胞早衰。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述蛋白表達量采用相對定量分析法統(tǒng)計，通過蛋白條帶的灰度分析，獲得不同細胞表達條帶的灰度值，以22PDL年輕細胞組為對照，設(shè)為1，其他細胞表達水平與22PDL年輕細胞組灰度值相比較；蛋白和內(nèi)參表達量通過Western blot檢測獲得；

所述22PDL年輕細胞組的定義為：繼代培養(yǎng)細胞最終的群體倍增水平PDL為22的細胞，PDL的計算公式為n＝3.32(logN2-logN1)+X，其中N2為該代細胞收獲的細胞總數(shù)，N1為上代接種的細胞數(shù)，X為上代細胞的PDL。

7.一種衰老檢測試劑盒，其特征在于，包括細胞中m⁶A RNA甲基化定量檢測試劑、和/或檢測甲基化酶METTL3、METTL14、WTAP、KIAA1429、去甲基化酶FTO和ALKBH5以及m⁶A RNA甲基化結(jié)合蛋白中至少一種的蛋白表達量檢測試劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的衰老檢測試劑盒，其特征在于，

所述的蛋白表達量檢測試劑為Western blot半定量檢測試劑。

9.權(quán)利要求7或8所述的衰老檢測試劑盒在非治療診斷檢測衰老中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括取待測細胞，提取總RNA，采用上述衰老檢測試劑盒進行m⁶A RNA甲基化含量檢測的步驟，或者將待測細胞提取總蛋白，采用上述衰老檢測試劑盒進行蛋白半定量的步驟。