[發明專利]一種重組人白介素-6的制備方法

在審

• 申請號: 202110139577.0
• 申請日: 2021-02-01
• 公開（公告）號: CN112679599A
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 任軍;王耀輝;賈凌云
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: C07K14/54
• 分類號: C07K14/54;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C12N15/24;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 周媛媛;李馨

本發明公開了一種重組人白介素?6的制備方法，屬于生物工程領域。包括如下步驟：(1)原核表達方式制備重組人白介素?6包涵體；(2)采用含尿素的洗滌緩沖液A中清洗重組人白介素?6包涵體，再用洗滌緩沖液B洗滌重組人白介素?6包涵體，離心收集固體；(3)初步純化后的重組人白介素?6包涵體經含有β?巰基乙醇的變性液中至完全溶解，緩慢加入復性液使重組人白介素?6包涵體復性，再進行透析和超濾濃縮；(4)使用填充Anti?IL?6高親和吸附劑的親和吸附柱對復性的重組人白介素?6包涵體進行親和純化，即得。本發明操作簡單，處理樣本大，步驟少，復性率高。本發明所涉及的重組人白介素?6的回收率為21％，具有較高的回收率。

技術領域

本發明屬于生物工程領域，具體涉及一種重組人白介素-6的制備方法。

背景技術

在1985年，人白介素-6基因首次克隆為B細胞刺激因子2(BSF-2)，B細胞刺激因子2可誘導B細胞產生免疫球蛋白(Ig)，白介素-6被證明是一種典型的細胞因子。

白介素-6(Tsagarakis S,Kontogeorgos G,Glannou P,et al.Interleukin-6,agrowth promoting cytokine,is present in human pituitary adenomas:animmunocytochemical study[J].Clinical Endocrinology,1992,37.)是一種單鏈糖蛋白，用于執行信號誘導B細胞分化和差異刺激或抑制細胞生長，具有不同的細胞來源，通常由激活的巨噬細胞、淋巴細胞以及上皮細胞分泌，含有183個氨基酸殘基，由于糖基化和磷酸化的程度不一樣，不同細胞來源的白介素-6的分子質量為22-30kDa。

白介素-6具有廣泛的生物學功能，白介素-6在炎癥、免疫反應、造血等方面具有多效性，它可以誘導肝內c反應蛋白(CRP)、補體C3、纖維蛋白原、血小板生成素、血清淀粉樣蛋白A和鐵調素等急性期蛋白的合成，而抑制白蛋白的生成。高濃度的淀粉樣蛋白長時間存在會形成并發癥淀粉樣變。白介素-6在肝細胞再生中具有濃度依賴性，高水平白介素-6可能抑制肝細胞再生，甚至加重肝損傷，鐵調素的產生也會造成與炎癥相關的低鐵血癥和貧血。在造血過程中，白介素-6促進造血干細胞的分化和巨核細胞的成熟，從而導致血小板的釋放。白介素-6不僅能促進纖維蛋白原的產生和血小板的釋放，而且能激活凝血系統。白介素-6在單核細胞表面誘導組織因子(TF)，通過啟動外源性凝血途徑促進凝血，進而導致凝血酶的產生。白介素-6也被證明可以激活血管內皮(VE)細胞。VE-鈣粘蛋白是一種重要的分子，通過同類分子間結合促進相鄰細胞的內皮粘附，而白介素-6可使其分解導致血管滲漏。此外，白介素-6增加了血管內皮生長因子(VEGF)的生成，從而誘導了VE-鈣粘蛋白的磷酸化和內化，從而對內皮細胞具有強大的血管通透性作用。通過白介素-6自身或通過VEGF的導入，血管通透性導致間質性水腫，升高組織壓力，導致炎癥性損傷。

白介素-6在獲得性免疫反應中也扮演著重要角色，白介素-6可以刺激抗體產生，促使CD4+細胞誘導分化為效應T細胞。白介素-6的持續或過度分泌失調導致各種疾病的發生或發展。過量表達的白介素-6參與Castleman病的淋巴結腫大,也會增強血管的再生和類風濕性關節炎患者的骨質疏松癥。同時白介素-6也作為重要的促炎癥細胞因子，在細胞因子風暴的擴大級聯反應中起重要作用。

白介素-6具有眾多的生物學功能，在一些疾病中被發現是一種可靠治療靶點，其中包括膿毒血癥，類風濕性關節炎等，有研究表明針對白介素-6的靶向治療在一些癌癥治療中也是有效的。