[發明專利]一種甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的多克隆抗體及其制備方法

在審

• 申請號: 202110135401.8
• 申請日: 2021-02-01
• 公開（公告）號: CN112920271A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 黃勇;潘嬌;張蕾;陳敏;阮雨萱;劉博宇;阮穎;皮博藝;何小力
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C07K16/16
• 分類號: C07K16/16;C07K16/06;C12N15/70;C12N15/29
• 代理公司: 長沙和雅知識產權代理事務所(普通合伙) 43238
• 代理人: 林傳貴

本發明屬于生物化學技術領域，具體涉及一種甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的多克隆抗體及其制備方法。本發明以甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的DNA片段設計引物對BnTZF1A?RRF和BnTZF1A?TZFR，構建重組原核表達載體，轉化表達細胞進行蛋白表達，得蛋白表達培養物純化后得到的目標產物進行動物免疫誘導抗體產生，最后對抗體純化即得甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的多克隆抗體。制備得到的甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的多克隆抗體特異性好。

技術領域

本發明屬于生物化學技術領域，具體涉及一種甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的多克隆抗體及其制備方法。

背景技術

中國發明專利名稱為“甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A及其引物、表達載體、應用和提高抗旱性的方法”(公開號為：CN110804614A)，公開了甘藍型油菜中的BnaTZF1A基因，然后構建BnaTZF1A基因的過表達載體CaMV35S::BnaTZF1A并轉化甘藍型油菜XY15(湘油15)，在甘藍型油菜中過表達BnaTZF1A基因，導致甘藍型油菜抗旱性增強，但是現階段缺少甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A蛋白相關的抗體。

發明內容

本發明目的是為了提供一種與甘藍型油菜抗旱相關因子BnaTZF1A蛋白特異性結合反應的兔抗BnaTZF1A多克隆抗體及其制備方法。

本發明的技術方案如下：

一種甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的多克隆抗體的制備方法，包括以下步驟：

(1)選擇甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A中抗原性強的蛋白片段的核酸序列，設計引物對BnTZF1A-RRF和BnTZF1A-TZFR進行克隆，構建重組原核表達載體；

(2)將步驟(1)中的重組原核表達載體轉化表達細胞進行蛋白表達，得蛋白表達培養物；

(3)將步驟(2)蛋白表達培養物進行純化，將純化得到的目標產物進行動物免疫誘導抗體產生，最后對抗體純化即得甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的多克隆抗體。

優選地，所述步驟(1)中編碼核酸序列如SEQ ID NO:1所示。

優選地，所述步驟(1)中BnTZF1A-RRF序列如SEQ ID NO:2所示，BnTZF1A-TZFR序列如SEQ ID NO:3所示。

優選地，所述步驟(1)重組原核表達載體為pET28a-SUMO-JT載體。

優選地，所述步驟(2)表達細胞為Rosetta(DE3)。

優選地，所述步驟(3)蛋白表達培養物的純化步驟為：用60ml預冷的NTA-0緩沖液重懸蛋白表達培養物，超聲破碎蛋白表達培養物，控制功率為300W，超聲4s，暫停4s，超聲99次；20000g4℃離心30min，分別收集上清和沉淀，用40μl 1X SDS-PAGE上樣緩沖液重懸，沸水浴5min后，取10ul進行蛋白電泳檢測，剩余上清和沉淀于0-7℃備用，電泳檢測，用親和層析樹脂進行純化。

一種甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的多克隆抗體。

本發明選擇甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A中抗原性強的蛋白片段的編碼核酸序列，設計引物對BnTZF1A-RRF和BnTZF1A-TZFR進行克隆，構建重組原核表達載體，轉化表達細胞進行蛋白表達，得蛋白表達培養物，用蛋白表達培養物純化后的目標產物進行動物免疫誘導抗體產生，最后對抗體純化即得甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的多克隆抗體，所得的甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的多克隆抗體特異性高，通過WB質控。

附圖說明

圖1為蛋白小量表達結果圖。

圖2為蛋白大量表達后進行蛋白電泳檢測圖。