[發(fā)明專利]一種甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的多克隆抗體及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110135401.8
• 申請日: 2021-02-01
• 公開（公告）號: CN112920271A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發(fā)明（設計）人: 黃勇;潘嬌;張蕾;陳敏;阮雨萱;劉博宇;阮穎;皮博藝;何小力
• 申請（專利權）人: 湖南農業(yè)大學
• 主分類號: C07K16/16
• 分類號: C07K16/16;C07K16/06;C12N15/70;C12N15/29
• 代理公司: 長沙和雅知識產權代理事務所(普通合伙) 43238
• 代理人: 林傳貴

1.一種甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的多克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

(1)選擇甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A中抗原性強的蛋白片段的編碼核酸序列，設計引物對BnTZF1A-RRF和BnTZF1A-TZFR進行克隆，構建重組原核表達載體；

(2)將步驟(1)中的重組原核表達載體轉化表達細胞進行蛋白表達，得蛋白表達培養(yǎng)物；

(3)將步驟(2)蛋白表達培養(yǎng)物進行純化，將純化得到的目標產物進行動物免疫誘導抗體產生，最后對抗體純化即得甘藍型油菜抗旱基因BnaTZF1A的多克隆抗體。

2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中編碼核酸序列如SEQID NO:1所示。

3.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中BnTZF1A-RRF序列如SEQ ID NO:2所示，BnTZF1A-TZFR序列如SEQ ID NO:3所示。

4.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中重組原核表達載體為pET28a-SUMO-JT載體。

5.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中表達細胞為Rosetta(DE3)。

6.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)蛋白表達培養(yǎng)物的純化步驟為：用60ml預冷的NTA-0緩沖液重懸蛋白表達培養(yǎng)物，超聲破碎蛋白表達培養(yǎng)物，控制功率為300W，超聲4s，暫停4s，超聲99次；20000g4℃離心30min，分別收集上清和沉淀，用40μl 1X SDS-PAGE上樣緩沖液重懸，沸水浴5min后，取10ul進行蛋白電泳檢測，剩余上清和沉淀于0-7℃?zhèn)溆茫娪緳z測，用親和層析樹脂進行純化。

7.一種利用如權利要求1-6任一所述的制備方法制備出的多克隆抗體。