[發明專利]一種定量分析抗結核藥血漿濃度的LC-MS/MS方法

在審

• 申請號: 202110132224.8
• 申請日: 2021-01-31
• 公開（公告）號: CN112924613A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 王醫成;譚志榮;李麗
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 長沙新裕知識產權代理有限公司 43210
• 代理人: 劉加

1.一種定量分析抗結核藥血漿濃度的LC-MS/MS方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1標準工作液配制：

a、分別精密稱取4種抗結核藥物標準品，分別用溶劑溶解后并稀釋至標準工作液；分別量取相同體積的所述4種抗結核藥物的標準工作液并混合，配置得到混合標準液；取所述混合標準液，用甲醇-水溶液稀釋至不同濃度的標準曲線系列工作液和不同濃度的質控系列工作液；

b、分別精密稱取內標標準品，并用甲醇溶解稀釋至內標工作液的濃度；分別量取所述內標工作液并混合，配制得到混合內標液；

S2樣品制備：

a、標準曲線樣品制備：以空白血漿作為空白基質，加入所述標準曲線系列工作液，渦旋混勻，配置不同濃度的標準曲線樣品；

b、質控樣品制備：以空白血漿作為空白基質，加入所述質控系列工作液，渦旋混勻，配制不同濃度的質控樣品；

S3樣品處理：往100μL目標樣品中加入800μL所述混合內標液，震蕩提取5min，15000r/min離心10min，吸取50μL上清液用450μL流動相混合液稀釋，得到待測目標樣品；

S4樣品檢測：取步驟S3的待測目標樣品2μL進行高效液相色譜串聯質譜檢測；

S5標準曲線制作和定量分析：分別以4種所述抗結核藥物標準品與各自內標的峰面積的比值為縱坐標，以4種所述抗結核藥物標準品各自在血漿樣本中的已知濃度為橫坐標，采用加權最小二乘法進行線性回歸，分別得到4種所述抗結核藥物標準品的標準曲線方程，再通過標準曲線定量所述待測目標樣品。

2.根據權利要求1所述的定量分析抗結核藥血漿濃度的LC-MS/MS方法，其特征在于，步驟S1中，所述4種抗結核藥物標準品分別為利福平、異煙肼、吡嗪酰胺以及乙胺丁醇。

3.根據權利要求2所述的定量分析抗結核藥血漿濃度的LC-MS/MS方法，其特征在于，所述溶劑為甲醇或甲醇-水溶液；所述異煙肼對應的內標是異煙肼-d4，所述利福平和所述吡嗪酰胺對應的內標是吡嗪酰胺-15Nd3，所述乙胺丁醇對應的內標是乙胺丁醇-d4。

4.根據權利要求3所述的定量分析抗結核藥血漿濃度的LC-MS/MS方法，其特征在于，所述混合內標液中，所述異煙肼-d4的濃度為33.33ng/mL，所述吡嗪酰胺-15Nd3的濃度為333.33ng/mL，所述乙胺丁醇-d4的濃度為200.00ng/mL。

5.根據權利要求4所述的定量分析抗結核藥血漿濃度的LC-MS/MS方法，其特征在于，步驟S2中，所述標準曲線樣品中，所述異煙肼的濃度分別為48.03ng/mL、96.06ng/mL、192.13ng/mL、384.26ng/mL、1152.78ng/mL、3458.33ng/mL、10375.00ng/mL以及31125.00ng/mL；所述利福平的濃度分別為49.15ng/mL、98.30ng/mL、196.60ng/mL、393.21ng/mL、1179.63ng/mL、3538.89ng/mL、10616.67ng/mL以及31850.00ng/mL；所述吡嗪酰胺的濃度分別為62.19ng/mL、124.38ng/mL、248.77ng/mL、497.53ng/mL、1492.59ng/mL、4477.78ng/mL、13433.33ng/mL以及40300.00ng/mL；所述乙胺丁醇的濃度分別為17.67ng/mL、35.34ng/mL、70.68ng/mL、141.36ng/mL、424.07ng/mL、1272.22ng/mL、3816.67ng/mL以及11450.00ng/mL。

6.根據權利要求5所述的定量分析抗結核藥血漿濃度的LC-MS/MS方法，其特征在于，步驟S2中，所述質控樣品中，所述異煙肼的濃度分別為100ng/mL、1000ng/mL及25000ng/mL；所述利福平的濃度分別為101.76ng/mL、1017.6ng/mL及25440ng/mL；所述吡嗪酰胺的濃度分別為128.96ng/mL、1289.6ng/mL及32240ng/mL；所述乙胺丁醇的濃度分別為36.76ng/mL、367.6ng/mL及9190ng/mL。