[發明專利]一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 202110123442.5
• 申請日: 2021-01-29
• 公開（公告）號: CN112946108A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 孔瑤;詹常森;姜鵬;溫方方;沈丹萍
• 申請（專利權）人: 上海和黃藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法，包括以下步驟：

1)供試品溶液的制備：將大黃粉樣品加入有機溶劑溶解，超聲提取后冷卻，取上清液過濾，取續濾液即得供試品溶液；

2)對照品溶液的制備：提供對照品溶液，所述對照品溶液包括蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、蘆薈大黃素-8-O-葡萄糖苷、蘆薈大黃素-3-羥甲基-O-葡萄糖苷、大黃酸-8-O-葡萄糖苷、大黃素-8-O-葡萄糖苷、大黃素-1-O-葡萄糖苷、大黃酚-8-O-葡萄糖苷、大黃酚-1-O-葡萄糖苷、大黃素甲醚-8-O-葡萄糖苷、番瀉苷A對照品和有機溶劑；

3)測定：采用相同色譜條件的高效液相色譜法分別測定供試品溶液和對照品溶液，獲得供試品溶液的指紋圖譜和對照品溶液的指紋圖譜，將供試品溶液的指紋圖譜與對照品溶液的指紋圖譜進行比較，對供試品溶液指紋圖譜中的指標成分進行歸屬定位，從而獲得大黃粉指紋圖譜。

2.根據權利要求1所述的一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟1)中，包括以下條件中任一項或多項：

A1)所述大黃粉樣品在制備供試品溶液前要進行⁶⁰Co-γ射線輻照；所述⁶⁰Co-γ射線輻照的劑量為3-10KGy；

A2)所述大黃粉樣品加入的重量g與所述有機溶劑加入的體積mL之比為0.2：20-30；

A3)所述有機溶劑為甲醇；

A4)所述超聲提取時間為40-50min。

3.根據權利要求1所述的一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟2)中，包括以下條件中任一項或多項：

B1)所述對照品溶液中各成分的含量范圍為：蘆薈大黃素為0.30-75.15μg/ml、大黃酸為0.08-20.06μg/ml、大黃素為0.16-41.22μg/ml、大黃酚為0.99-248.98μg/ml、大黃素甲醚為0.34-84.54μg/ml、蘆薈大黃素-8-O-葡萄糖苷為0.71-178.39μg/ml、蘆薈大黃素-3-羥甲基-O-葡萄糖苷為0.12-28.91μg/ml、大黃酸-8-O-葡萄糖苷為0.15-37.85μg/ml、大黃素-8-O-葡萄糖苷為0.13-32.56μg/ml、大黃素-1-O-葡萄糖苷為0.10-25.72μg/ml、大黃酚-8-O-葡萄糖苷為0.60-149.39μg/ml、大黃酚-1-O-葡萄糖苷為0.33-83.27μg/ml、大黃素甲醚-8-O-葡萄糖苷為0.26-66.12μg/ml、番瀉苷A為0.76-37.94μg/ml；

B2)所述有機溶劑為甲醇。

4.根據權利要求1所述的一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟3)中，所述高效液相色譜法的色譜條件為：色譜柱為T3色譜柱；檢測器為光電二極管陣列檢測器PDA；柱溫為25-35℃；進樣量為0.5-10μL；流速為0.1-1.0mL/min；檢測波長為400-420nm；流動相為甲醇-0.05-0.2％磷酸水溶液，其中，A相為甲醇，B相為0.05-0.2％磷酸水溶液；分析時間為31min；梯度洗脫。

5.根據權利要求4所述的一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，所述梯度洗脫的具體程序為：0-6min，A相：B相體積比為41：59-45：55；6-8min，A相：B相體積比為45：55-52：48；8-14min，A相：B相體積比為52：48-54：46；14-19min，A相：B相體積比為54：46-69：31；19-23min，A相：B相體積比為69：31-79：21；23-25min，A相：B相體積比為79：21-99：1；25-30min，A相：B相體積比為99：1-100：0；30-31min，A相：B相體積比為100：0-41：59。

6.根據權利要求1-5任一所述的一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法在大黃粉中成分的質量檢測中的用途。

7.一種大黃粉的質量檢測方法，包括采用權利要求1-5任一所述的大黃粉指紋圖譜的檢測方法獲得大黃粉指紋圖譜，將得到的大黃粉指紋圖譜與相同指紋圖譜檢測條件下獲得的大黃粉的標準指紋圖譜進行相似度比較。