[發明專利]一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 202110123442.5
• 申請日: 2021-01-29
• 公開（公告）號: CN112946108A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 孔瑤;詹常森;姜鵬;溫方方;沈丹萍
• 申請（專利權）人: 上海和黃藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

本發明提供一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法。本發明還提供了上述大黃粉指紋圖譜的檢測方法在大黃粉中成分的質量檢測中的用途及其質量檢測方法。本發明進一步提供了上述大黃粉中14種成分含量的測定方法。本發明提供的一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法及其應用，建立了大黃粉的高效液相指紋圖譜，能夠對大黃粉中14種化學成分進行了定量分析，并有效降低大黃粉生藥粉中的微生物含量，保證臨床用藥的安全有效，為更好地建立大黃粉整體質量控制評價體系提供科學試驗依據。

技術領域

本發明屬于中藥成分檢測的技術領域，涉及一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法及其應用，具體涉及一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法及其大黃粉中14種有效成分的含量測定方法。

背景技術

大黃為我國傳統常用中藥材，始載于《神農本草經》列為下品，并收錄于歷版《中國藥典》中，其中2015版《中國藥典》收載的正品大黃為蓼科植物掌葉大黃、唐古特大黃和藥用大黃的干燥根及根莖，具有瀉下攻積，清熱瀉火，涼血解毒，逐瘀通經，利濕退黃的功效。用于實熱積滯便秘，血熱吐衄，目赤咽腫，癰腫疔瘡，腸癰腹痛，瘀血經閉，產后瘀阻，跌打損傷，濕熱痢疾，黃疸尿赤，淋證，水腫；外治燒燙傷。

公司重點產品膽寧片在制劑過程中以大黃藥材粉碎后的大黃粉作為中間體進行生產加工。但中成藥的藥材原料粉及制作工藝較復雜，生產過程中容易受各種微生物的污染，影響制劑成品的質量。因此需要對膽寧片中間體大黃粉進行生產滅菌。

中藥指紋圖譜具有整體、宏觀、模糊分析等特點，可通過對中藥整體特征的描述，采用適當模糊處理方式，能較全面地反映出其內含化學成分的種類及數量，達到整體質量控制的目的，因此成為中藥質量控制的有效手段，已廣泛應用于中藥質量監測和評價領域。其中色譜指紋圖譜分析可以使中藥所含多種化學組分的整體特征可視化，從而披露出常規檢驗難以發現的質量問題。指紋圖譜是根據中藥多組分、多靶點的整體綜合作用的特點，從“全成分”的角度出發的一種現代中藥質量控制方法，對非單一成分藥物的質量控制更加全面。

大黃藥材中化學成分復雜，因此，有必要建立大黃粉的指紋圖譜與多成分含量測定，能夠完成對大黃粉中成分的定性定量分析，以便對大黃粉進行有效的質量控制。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法及其應用，采用優化條件的前處理及高效液相色譜方法(UPLC-PDA)，建立了大黃粉的高效液相指紋圖譜，從不同側面突出反映不同類別化學成分對大黃粉指紋圖譜系統的貢獻。同時，對大黃粉中14種有效成分進行檢測，較全面的反映大黃粉中各成分的現狀，并控制大黃粉中的微生物水平，為整體控制和評價大黃粉質量提供參考依據。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明第一方面提供一種大黃粉指紋圖譜的檢測方法，包括以下步驟：

1)供試品溶液的制備：將大黃粉樣品加入有機溶劑溶解，超聲提取后冷卻，取上清液過濾，取續濾液即得供試品溶液；

2)對照品溶液的制備：提供對照品溶液，所述對照品溶液包括蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、蘆薈大黃素-8-O-葡萄糖苷、蘆薈大黃素-3-羥甲基-O-葡萄糖苷、大黃酸-8-O-葡萄糖苷、大黃素-8-O-葡萄糖苷、大黃素-1-O-葡萄糖苷、大黃酚-8-O-葡萄糖苷、大黃酚-1-O-葡萄糖苷、大黃素甲醚-8-O-葡萄糖苷、番瀉苷A對照品和有機溶劑；

3)測定：采用相同色譜條件的高效液相色譜(HPLC)法分別測定供試品溶液和對照品溶液，獲得供試品溶液的指紋圖譜和對照品溶液的指紋圖譜，將供試品溶液的指紋圖譜與對照品溶液的指紋圖譜進行比較，對供試品溶液指紋圖譜中的指標成分進行歸屬定位，從而獲得大黃粉指紋圖譜。

優選地，步驟1)中，所述大黃粉樣品為將大黃生藥粉碎后獲得的粉末樣品。

優選地，步驟1)中，所述大黃粉樣品在制備供試品溶液前要進行⁶⁰Co-γ射線輻照。