[發(fā)明專利]一種甜葉菊萊鮑迪苷D快速檢測(cè)模型的建立方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110119145.3
• 申請(qǐng)日: 2021-01-28
• 公開（公告）號(hào): CN112945898A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳建國(guó);朱志玉;韓佳慧;朱祝軍;祝彪;許盛龍;傅敏杰;鄭文;張萼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/359
• 分類號(hào): G01N21/359;G01N21/3563;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/36;G06F17/18
• 代理公司: 北京金智普華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401
• 代理人: 張曉博

本發(fā)明公開了一種甜葉菊萊鮑迪苷D快速檢測(cè)模型的建立方法，模型的建立方法主要包括以下步驟：用近紅外光譜儀采集甜葉菊干葉粉樣品的近紅外光譜；根據(jù)光譜選擇具有代表性的甜葉菊干葉粉樣作為定標(biāo)樣品和檢驗(yàn)樣品；用高效液相色譜法精確分析甜葉菊樣品中的萊鮑迪苷D含量；對(duì)近紅外光數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理；使用偏最小二乘回歸（PLS），建立甜葉菊干葉粉樣品中萊鮑迪苷D含量的紅外光譜定標(biāo)方程模型；應(yīng)用檢驗(yàn)樣品集對(duì)定標(biāo)模型的預(yù)測(cè)性能進(jìn)行評(píng)價(jià)；建立誤差小、決定系數(shù)高的近紅外分析模型和方法。本發(fā)明分析速度快、無(wú)需樣品預(yù)處理、檢測(cè)精度高、可及時(shí)分析甜葉菊萊鮑迪苷D的含量，為甜葉菊的品質(zhì)改良提供了方便、快捷、高效的分析方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種甜葉菊萊鮑迪苷D快速檢測(cè)模型的建立方法。

背景技術(shù)

甜葉菊甜菊糖中的甜味組分屬二萜糖苷類物質(zhì)，具有共同的甜菊醇苷元結(jié)構(gòu)，因苷元上取代糖基不同，構(gòu)成了至少9種不同的二萜糖苷類物質(zhì)。含量最高的兩個(gè)組分為甜菊苷(Stevioside，St，2～16％)和萊鮑迪苷A(RebaudiosideA，RA，0～12％)，甜度分別為蔗糖的300倍和350倍。RA組分不僅甜度高于St組分，而且口味優(yōu)于St，并與蔗糖接近。因此，一般以RA組分在甜菊糖總苷中的含量和比例的高低作為衡量甜葉菊品種及甜菊糖品質(zhì)的主要指標(biāo)。目前，在國(guó)內(nèi)外大面積種植的品種主要是日本的守田2號(hào)和守田3號(hào)，其主要組分均為RA。最近研究發(fā)現(xiàn)甜菊糖苷中存在含量較低的萊鮑迪苷D(Rebaudioside D，RD，0.1％以下)組分，其甜度與前二者相近(蔗糖的250倍)，熔點(diǎn)達(dá)280℃，居各種糖苷首位；RD味質(zhì)和穩(wěn)定性均優(yōu)于前二者，提高RD含量和降低St含量，將明顯改善甜菊糖味質(zhì)，因此，RD是非常有應(yīng)用前景的新型甜菊糖苷。近紅外(NIR)光譜測(cè)定技術(shù)是近年來(lái)新崛起的一種物理測(cè)定方法和技術(shù)，具有不稱樣、無(wú)樣品預(yù)處理、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，優(yōu)勢(shì)明顯。有國(guó)外學(xué)者應(yīng)用近紅外光譜技術(shù)用于甜葉菊中St單糖苷的分析，初步獲得成功。本發(fā)明，利用該近紅外光譜技術(shù)發(fā)展甜葉菊葉中新組分萊鮑迪苷D的一種快速測(cè)定方法，建立了可供育種者、生產(chǎn)企業(yè)等方便使用的快捷、高效的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種利用近紅外光譜技術(shù)快速檢測(cè)甜葉菊葉中新組分萊鮑迪苷D的測(cè)定方法，用以實(shí)現(xiàn)對(duì)甜葉菊葉中新組分萊鮑迪苷D的快速檢測(cè)，對(duì)于育種者、生產(chǎn)企業(yè)實(shí)現(xiàn)對(duì)萊鮑迪苷D快捷、高效的檢測(cè)具有重要意義。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種甜葉菊萊鮑迪苷D快速檢測(cè)模型的建立方法，其特征在于，所述模型的建立方法包括以下步驟：

(1)分析樣品準(zhǔn)備，收集遺傳上有多樣化的甜葉菊樣品；

(2)樣品集的確定，用近紅外光譜儀采集所述甜葉菊樣品的近紅外光譜，光譜掃描范圍為4000～10000cm^-1；

(3)根據(jù)光譜選擇具有代表性的甜葉菊干葉粉樣作為定標(biāo)樣品集和檢驗(yàn)樣品集；

(4)甜葉菊萊鮑迪苷D含量測(cè)定，用高效液相色譜法處理分析定標(biāo)樣品集和檢驗(yàn)樣品集中甜葉菊樣品的萊鮑迪苷D含量；

(5)對(duì)定標(biāo)樣品集近紅外光數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，包括數(shù)學(xué)處理和散射處理，以此消除干擾變量；

(6)根據(jù)定標(biāo)樣品集預(yù)處理后的甜葉菊干葉近紅外光譜與甜葉菊萊鮑迪苷D含量之間的關(guān)系建立回歸方程，使用偏最小二乘回歸(PLS)，構(gòu)建甜葉菊干葉粉樣品中萊鮑迪苷D含量定標(biāo)方程模型；

(7)應(yīng)用檢驗(yàn)樣品集對(duì)定標(biāo)方程的預(yù)測(cè)性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，建立所述近紅外快速分析檢測(cè)模型。

進(jìn)一步地，步驟(1)中所述甜葉菊樣品采集依據(jù)和前處理方法為：采集對(duì)象為分支多，葉片多且厚，無(wú)枯葉和深色葉，無(wú)嚴(yán)重病蟲害的植株，各種大小葉形、葉色深淺均收，采集于單株現(xiàn)蕾期，收割5～8個(gè)分枝，置于陰涼下晾24h，再干燥，后手工脫葉，葉片粉碎，過(guò)60目篩。