[發明專利]分析溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺殘留的VHH-ELISA試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202110112240.0
• 申請日: 2021-01-27
• 公開（公告）號: CN112920277B
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發明（設計）人: 王楷;徐波杰;許艇;譚兵;薛銜樂;黃澤愷
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K14/435;C12N15/13;C07D401/04;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/53
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 盛大文

本發明提供分析溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺殘留的VHH?ELISA試劑盒及其應用，其溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺的納米抗體包含如下的氨基酸序列或由其組成：i)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；或，ii)在i)的N端和/或C端連接標簽得到的氨基酸序列；或，iii)i)或ii)的所述氨基酸序列經取代、缺失和/或增加一個或多個氨基酸得到的具有相同功能的氨基酸序列。本發明還提供一種新的溴氰蟲酰胺半抗原。本發明提供的納米抗體能用于準確、靈敏地檢測水、土壤和蔬菜等植物中溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺殘留。而且樣品的前處理過程簡單，耗時少，能同時檢測大量的樣品，樣品檢測成本遠低于傳統的儀器檢測方法。

技術領域

本發明涉及基因工程、噬菌體展示技術、ELISA檢測技術領域，尤其涉及分析溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺殘留的ELISA試劑盒及其應用。

背景技術

溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺都屬于魚尼丁受體抑制劑，都是鄰氨基苯甲酰胺類殺蟲劑，由于這類農藥具有高效、廣譜性好等優點，被廣泛應用于農業中。然而，這類農藥對水生無脊椎動物以及蜜蜂毒性較大，過度曝露在該農藥中也會對人體產生較大的危害。因此，加強溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺殘留的檢測，對于科學合理地使用溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺，保障食品安全、生態環境安全和人體健康，增強農副產品的國際競爭力，保持農業的可持續發展等具有重要意義。

目前已報道的溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺殘留檢測方法主要是儀器分析法，包括高效液相色譜法(HPLC)和氣質或液質聯用法 (GC-MS或LC-MS)等。但是運用這些方法需要專業化的實驗室、專用儀器設備及專業操作人員，再加上樣品前處理復雜，分析成本高，難以滿足大量樣本現場快速監測的需要。20世紀90年代以來，快速發展的免疫分析技術已被應用于農藥殘留分析和環境監測，具有簡便快速、廉價高效、特異性強、靈敏度高等優點。

基于常規抗體(多克隆抗體和單克隆抗體)的溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺殘留酶聯免疫吸附分析方法穩定性相對較低，目前業界亟待解決以抗溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺納米抗體為基礎，采用酶聯免疫吸附分析方法來檢測農藥殘留的難題。

發明內容

本發明實施例提供溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺的納米抗體，本發明提供的納米抗體能用于準確、靈敏地檢測水、土壤和蔬菜等植物中溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺殘留。

本發明實施例提供溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺的納米抗體，所述納米抗體包含如下的氨基酸序列或由其組成：

i)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；或

ii)在i)的N端和/或C端連接標簽得到的氨基酸序列；或

iii)i)或ii)的所述氨基酸序列經取代、缺失和/或增加一個或多個氨基酸得到的具有相同功能的氨基酸序列。本發明中，包含上述氨基酸序列的多肽用于作為抗溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺的納米抗體，能準確、靈敏地檢測水、土壤和蔬菜等植物中溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺殘留。

本發明提供的用于抗溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺的納米抗體，有效克服目前農藥殘留儀器分析方法成本高、前處理復雜、特異性差、靈敏度低和難以實驗現場檢測等缺點，具有高特異性、高靈敏度、高準確度、高精確度、操作方法簡單，并能用于大批量樣品快速檢測，分析溴氰蟲酰胺或氯蟲苯甲酰胺殘留的ELISA檢測試劑盒。適用于水、土壤、蔬菜等樣品中溴氰蟲酰胺或氯蟲苯甲酰胺殘留的快速測定。

本發明實施例還提供一種編碼所述抗溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺的納米抗體的核酸分子。

本發明實施例還提供一種含有所述編碼所述抗溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺的納米抗體的核酸分子的生物材料，所述生物材料為重組 DNA、表達盒、轉座子、質粒載體、噬菌體載體、病毒載體或工程菌。

本發明實施例還提供一種溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺檢測試劑或試劑盒，有效成分為所述溴氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺的納米抗體。