[發(fā)明專利]一種電化學免疫傳感器及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110112052.8
• 申請日: 2021-01-27
• 公開（公告）號: CN112730565A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發(fā)明（設計）人: 蔣曉華;丁文捷;呂智文
• 申請（專利權）人: 深圳職業(yè)技術學院
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 深圳市嘉宏博知識產權代理事務所 44273
• 代理人: 李杰

一種電化學免疫傳感器，包括有石墨烯帶（GNR）、借助π?π堆積固定在石墨烯帶（GNR）的表面上的3,4,9,10?苝四羧酸（PTCA）、借助酰胺鍵固定在石墨烯帶（GNR）的表面上的牛血清蛋白（BSA）、借助酰胺鍵固定在3,4,9,10?苝四羧酸（PTCA）的表面上的一級抗體（PAb）、金納米粒子（Au?NPs）、通過Au?S鍵固定在金納米粒子（Au?NPs）表面的二茂鐵衍生物（Fc?SH）、借助靜電吸附在金納米粒子（Au?NPs）表面的二級抗體（SAb）。本發(fā)明PTCA/GNR表面可以固定大量的PAb，從而提高了傳感性能；具有良好的分析性能，線性范圍寬（10～2×10⁴ CFU mL^?1），檢測限低（6 CFU mL^?1），具有理想的特異性。

技術領域

本發(fā)明涉及一種電化學免疫傳感器及其制備方法。

背景技術

單核細胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM）是一種革蘭氏陽性的食源性致病菌，可引起腦膜炎、敗血癥、流產、發(fā)熱性胃腸炎等多種嚴重疾病，其高死亡率（約30%）和高發(fā)病率已對人類健康構成嚴重威脅。一般來說，孕婦、新生兒、免疫功能低下者以及老年人都易感染LM。此外，LM可以在水、土壤、植物、動物或人類糞便中，甚至在惡劣的環(huán)境中生存；同時，LM還可以污染大量的食品，如牛奶、肉類、奶酪、生蔬菜、冰淇淋、甜瓜等。LM已被確認為危害生命最嚴重的病原菌之一。在美國，疾病控制和預防中心估計每年有1000例與李斯特菌病有關的感染，死亡人數(shù)超過200人，并且已經形成了對食品中LM存在的零容忍政策；而在加拿大，它只允許食品中含有100 CFU/g LM。因此，迫切需要發(fā)展敏感和準確的LM檢測方法。

目前用于LM檢測的常規(guī)方法有酶聯(lián)免疫吸附法、聚合酶鏈反應法、表面等離子體共振法、石英晶體微天平免疫傳感器和光纖免疫傳感器等。這些方法無疑是非常重要的，能夠滿足LM檢測的需要。然而，它們往往存在著勞動強度大、耗時長、設備昂貴、預處理復雜等缺點。與其他方法相比，電化學方法具有操作簡單、成本低廉等優(yōu)點，已經成功地構建了一些優(yōu)越的電化學傳感平臺來檢測LM。盡管這些傳感平臺在LM檢測中有著重要的應用，但是靈敏度低和優(yōu)越性，傳感性能低，分析性能差，線性范圍窄，檢測限高，特異性不夠理想。

發(fā)明內容

本發(fā)明要解決的技術問題在于：為了克服現(xiàn)有技術的缺陷，本發(fā)明提出一種電化學免疫傳感器及其制備方法。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明提出下列技術方案：一種電化學免疫傳感器，包括有石墨烯帶（GNR）、借助π-π堆積固定在石墨烯帶（GNR）的表面上的3,4,9,10-苝四羧酸（PTCA）、借助酰胺鍵固定在石墨烯帶（GNR）的表面上的牛血清蛋白（BSA）、借助酰胺鍵固定在3,4,9,10-苝四羧酸（PTCA）的表面上的一級抗體（PAb）、金納米粒子（Au-NPs）、通過Au-S鍵固定在金納米粒子（Au-NPs）表面的二茂鐵衍生物（Fc-SH）、借助靜電吸附在金納米粒子（Au-NPs）表面的二級抗體（SAb）。

上述技術方案的進一步限定在于，3,4,9,10-苝四羧酸（PTCA）固定在石墨烯帶（GNR）上形成親水的3,4,9,10-苝四羧酸/石墨烯（PTCA/GNR）納米雜化物，作為傳感平臺。

上述技術方案的進一步限定在于，將Fc衍生物（Fc-SH）和二級抗體（SAb）分別通過Au-S鍵和靜電吸附組裝在Au-NPs表面，作為信號放大器（SAb-Au-NPs-Fc）。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明提出下列技術方案：一種電化學免疫傳感器的制備方法，其包括如下步驟：

步驟1：PTCA/GNR的制備，具體如下：