[發明專利]一種電化學免疫傳感器及其制備方法

在審

• 申請號: 202110112052.8
• 申請日: 2021-01-27
• 公開（公告）號: CN112730565A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 蔣曉華;丁文捷;呂智文
• 申請（專利權）人: 深圳職業技術學院
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 深圳市嘉宏博知識產權代理事務所 44273
• 代理人: 李杰

1.一種電化學免疫傳感器，其特征在于，其包括有石墨烯帶（GNR）、借助π-π堆積固定在石墨烯帶（GNR）的表面上的3,4,9,10-苝四羧酸（PTCA）、借助酰胺鍵固定在石墨烯帶（GNR）的表面上的牛血清蛋白（BSA）、借助酰胺鍵固定在3,4,9,10-苝四羧酸（PTCA）的表面上的一級抗體（PAb）、金納米粒子（Au-NPs）、通過Au-S鍵固定在金納米粒子（Au-NPs）表面的二茂鐵衍生物（Fc-SH）、借助靜電吸附在金納米粒子（Au-NPs）表面的二級抗體（SAb）。

2.根據權利要求1所述的電化學免疫傳感器，其特征在于，3,4,9,10-苝四羧酸（PTCA）固定在石墨烯帶（GNR）上形成親水的3,4,9,10-苝四羧酸/石墨烯（PTCA/GNR）納米雜化物，作為傳感平臺。

3.根據權利要求1所述的電化學免疫傳感器，其特征在于，將Fc衍生物（Fc-SH）和二級抗體（SAb）分別通過Au-S鍵和靜電吸附組裝在Au-NPs表面，作為信號放大器（SAb-Au-NPs-Fc）。

4.一種如權利要求1所述的電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟：

步驟1：PTCA/GNR的制備，具體如下：

將50.0 mg 碳納米管（CNT）分散在玻璃瓶中的濃H₂SO₄/H₃PO₄（體積比9:1）中攪拌1h，然后添加250.0 mg KMnO₄；將形成的混合物加熱至65℃并保持2小時，然后將其倒入含有H₂O₂的冰水中以使反應猝滅；經過過濾、洗滌和干燥，得到了初始的氧化石墨烯納米帶（GONR）；在GONR分散液中加入氨水和聯氨溶液，在60℃攪拌下加熱10h，過濾和洗滌后可獲得GNR；

將50.0 mg GNR在含有20.0 mg PTCA的100.0 mL乙醇中超聲處理1 h，并且在室溫下將溶液連續攪拌2 h，得到的混合物通過尼龍膜（0.22 mm）過濾，洗滌幾次并干燥，從而形成PTCA/GNR；

步驟2：SAb-Au NPs-Fc的制備，具體如下：

將0.2 mol L^?1檸檬酸鈉（400μL）逐滴添加到0.2 mg mL^?1 HAuCl₄溶液（12.0 mL）中，并在60℃下加熱2小時，離心得到金納米粒子并干燥；在1.0mL金納米粒子溶液中加入20.0μLSAb孵育2小時，然后在SAb金納米粒子溶液中加入1.0mM Fc-SH溶液（20.0μL），得到SAb-AuNPs-Fc；步驟3：BSA/PAb/PTCA/GNR/GCE的制備，具體如下：在拋光的玻璃碳電極（GCE）表面滴加12.0μL PTCA/GNR懸浮液（0.5 mg mL^?1），并用碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺（EDC/NHS）混合物處理以激活羧基；在活化后的PTCA/GNR/GCE表面滴加12.0μL一級抗體（PAb），記作PAb/PTCA/GNR/GCE；然后用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗PAb/PTCA/GNR/GCE，除去未結合的PAb，同時與牛血清蛋白（BSA）孵育，制備BSA/PAb/PTCA/GNR/GCE；

步驟4：SAb-Au-NPs-Fc的制備，具體如下：將0.2 mol L^?1檸檬酸鈉（400μL）逐滴添加到0.2 mg mL^?1 HAuCl₄溶液（12.0 mL）中，并在60℃下加熱2小時，離心得到金納米粒子Au NPs并干燥；接著，在1.0mL金納米粒子溶液中加入20.0μL SAb（0.05 mg mL^-1）孵育2小時，然后在SAb金納米粒子溶液中加入1.0mM Fc-SH溶液（20.0μL），即得到SAb-Au NPs-Fc。