[發(fā)明專利]一種基于乳腺癌細(xì)胞外囊泡的腫瘤疫苗及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110110531.6
• 申請(qǐng)日: 2021-01-27
• 公開（公告）號(hào): CN112870340B
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李宏江;肖凱;陳宣明;肖舒文;龍泉伊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K39/00
• 分類號(hào): A61K39/00;A61K9/127;A61K47/46;C12N5/09;A61P35/00;A61P37/04;A61K47/54;A61K45/06
• 代理公司: 北京勁創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11589
• 代理人: 李康

本發(fā)明適用于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種基于乳腺癌細(xì)胞外囊泡的腫瘤疫苗及其制備方法。該制備方法包括：在培養(yǎng)過程中對(duì)乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行處理；提取乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)上清中的細(xì)胞外囊泡；將所述細(xì)胞外囊泡與Toll樣受體激動(dòng)劑混合于PBS液中，制備TLR@EV溶液；將DSPE?PEG?Man粉末溶于PBS液中，并將其加入所述TLR@EV溶液中，制備得到TLR@EV?Man腫瘤疫苗。本發(fā)明制備的基于乳腺癌細(xì)胞外囊泡的腫瘤疫苗采用多免疫抗原聯(lián)合免疫藥物的治療方法，通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞刺激機(jī)體發(fā)揮有效的主動(dòng)免疫作用，進(jìn)而利用自身免疫功能抑制腫瘤生長(zhǎng)，進(jìn)而達(dá)到消除腫瘤的目的，為臨床治療增添新思路，有較高的臨床應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于乳腺癌細(xì)胞外囊泡的腫瘤疫苗及其制備方法。

背景技術(shù)

腫瘤疫苗(tumor vaccine)是將腫瘤抗原以不同形式如：腫瘤細(xì)胞、腫瘤相關(guān)蛋白或多肽、表達(dá)腫瘤抗原的基因等，導(dǎo)入患者體內(nèi)，提供抗原并刺激合適的抗原提呈細(xì)胞(Antigen-Presenting Cell,APC)將抗原加工成抗原肽，并呈遞給內(nèi)源性的T細(xì)胞，強(qiáng)化T細(xì)胞攻擊腫瘤的作用，誘導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答，實(shí)現(xiàn)抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和以及復(fù)發(fā)的目的。盡管在100多年前有學(xué)者就提議可以在臨床上應(yīng)用腫瘤疫苗的提議，但它真正意義上在臨床上發(fā)揮效用僅僅是在近十年的時(shí)間里。2006年，F(xiàn)DA批準(zhǔn)了人類歷史上第一個(gè)腫瘤疫苗，即預(yù)防性腫瘤疫苗-Cervarix，這種疫苗可以降低人類宮頸癌的發(fā)病率，隨后2010年4月，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)Provenge/sipuleucel-T用于治療晚期前列腺癌，使其成為第一個(gè)自體主動(dòng)免疫療法藥及第一個(gè)真正的治療性癌癥疫苗。

目前腫瘤疫苗有四種常見的疫苗，第一種是全細(xì)胞疫苗，在腫瘤異性抗原還未明確知道的情況下，腫瘤全細(xì)胞疫苗包含了完整的腫瘤相關(guān)抗原，能夠引起全面有效的腫瘤應(yīng)答；第二種的多肽疫苗是利用腫瘤特異性抗原、癌基因或抑癌基因突變蛋白、病毒相關(guān)抗原等多肽組成的疫苗。第三種是基因工程疫苗是通過基因工程技術(shù)，把經(jīng)過編碼的腫瘤特異性抗原的基因負(fù)載在重組后的病毒載體或質(zhì)粒DNA上，然后直接注射入體內(nèi)，通過載體本身或者人體基因表達(dá)系統(tǒng)，引起特異性的體液免疫和細(xì)胞免疫。RNA-脂質(zhì)體疫苗刺激BMDC細(xì)胞成熟，然后釋放細(xì)胞因子，進(jìn)而激活T細(xì)胞，以達(dá)到后面攻擊腫瘤細(xì)胞的效果，但是這類基因疫苗也存在不少缺點(diǎn)，因?yàn)槠溟L(zhǎng)期表達(dá)低水平的抗原，容易引起免疫耐受。

現(xiàn)有的認(rèn)知表明，機(jī)體的主動(dòng)免疫作用在控制乳腺癌細(xì)胞形成過程中起關(guān)鍵作用。在乳腺腫瘤細(xì)胞建立起逃避機(jī)體免疫監(jiān)視的機(jī)制后，腫瘤實(shí)體即逐漸形成，成為臨床可見的乳腺癌。腫瘤細(xì)胞之所以能夠逃脫免疫監(jiān)視有以下原因：(1)腫瘤細(xì)胞可以包被、隱藏自身可被識(shí)別的抗原，使其無法被免疫提呈細(xì)胞識(shí)別；(2)腫瘤能夠分泌多種抑制因子，使抗原提呈細(xì)胞無法進(jìn)入腫瘤內(nèi)進(jìn)行抗原提?。?3)乳腺癌細(xì)胞具有較高的異質(zhì)性，在腫瘤細(xì)胞增殖分化過程中，一些抗原只在部分腫瘤細(xì)胞上表達(dá)，使特定的免疫反應(yīng)不能覆蓋所有癌細(xì)胞，這些原因都使得機(jī)體不能利用自身免疫功能治療腫瘤，所以需要全新的疫苗來克服上述困難，以便更好地發(fā)揮腫瘤的主動(dòng)免疫作用，并推廣到臨床。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述難題，本發(fā)提供了一種基于乳腺癌細(xì)胞外囊泡的腫瘤疫苗及其制備方法。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種基于乳腺癌細(xì)胞外囊泡的腫瘤疫苗的制備方法，包括以下步驟：

步驟S1：在培養(yǎng)過程中對(duì)乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行刺激處理；

步驟S2：提取乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)上清中的細(xì)胞外囊泡；

步驟S3：將所述細(xì)胞外囊泡與Toll樣受體激動(dòng)劑混合，制備TLR@EV溶液；

步驟S4：將DSPE-PEG-Man溶液加入所述TLR@EV溶液中，制備TLR@EV-Man腫瘤疫苗。

進(jìn)一步地，所述步驟S1中，在培養(yǎng)過程中對(duì)乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行刺激處理可通過以下方法之一實(shí)現(xiàn)：