[發(fā)明專利]一種基于乳腺癌細(xì)胞外囊泡的腫瘤疫苗及其制備方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110110531.6 | 申請(qǐng)日： | 2021-01-27 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN112870340B | 公開（公告）日： | 2022-09-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李宏江;肖凱;陳宣明;肖舒文;龍泉伊 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 四川大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | A61K39/00 | 分類號(hào)： | A61K39/00;A61K9/127;A61K47/46;C12N5/09;A61P35/00;A61P37/04;A61K47/54;A61K45/06 |
| 代理公司： | 北京勁創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11589 | 代理人： | 李康 |
| 地址： | 610000 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 乳腺 癌細(xì)胞 外囊泡 腫瘤 疫苗 及其 制備 方法 | ||
1.一種基于乳腺癌細(xì)胞外囊泡的腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟S1：在培養(yǎng)過程中對(duì)乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行刺激處理；
步驟S2：提取乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)上清中的細(xì)胞外囊泡；
步驟S3：將所述細(xì)胞外囊泡與Toll樣受體激動(dòng)劑混合，制備TLR@EV溶液；
步驟S4：將DSPE-PEG-Man溶液加入所述TLR@EV溶液中，制備TLR@EV-Man腫瘤疫苗；
所述步驟S2中，提取乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)上清中的細(xì)胞外囊泡通過以下方法實(shí)現(xiàn)：采用碎裂細(xì)胞獲得細(xì)胞膜，然后擠壓制造獲得；
所述步驟S4中，包括以下步驟：步驟S4-1：將DSPE-PEG-Man粉末溶于PBS液中，得到DSPE-PEG-Man溶液；步驟S4-2：將上述步驟S4-1所得的DSPE-PEG-Man溶液加入TLR@EV溶液中，形成混合液；步驟S4-3：將上述步驟S4-2所得的混合液在4℃條件下，攪拌1-1.5小時(shí)；步驟S4-4：在14000-15000rpm條件下離心10-15分鐘，獲得固體TLR@EV-Man腫瘤疫苗；步驟S4-5：用PBS液重懸上述固體TLR@EV-Man腫瘤疫苗，得到液體TLR@EV-Man腫瘤疫苗。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S1中，在培養(yǎng)過程中對(duì)乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行刺激處理通過以下方法之一實(shí)現(xiàn)：
(1)采用x-ray輻射照射刺激處理；
(2)采用次氯酸過氧化刺激處理；
(3)采用缺氧培養(yǎng)刺激處理。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S3中，包括以下步驟：
步驟S3-1：將2:1重量的細(xì)胞外囊泡與Toll樣受體激動(dòng)劑混合于PBS液中，形成混合液；
步驟S3-2：將上述步驟S3-1所得的混合液在37℃條件下?lián)u動(dòng)溫育1-1.5小時(shí)，獲得TLR@EV溶液。
4.一種基于乳腺癌細(xì)胞外囊泡的腫瘤疫苗，其特征在于，采用如權(quán)利要求1-3任一所述的方法制備。
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