[發明專利]從頭合成萊鮑迪苷M的釀酒酵母工程菌及其應用

在審

• 申請號: 202110106054.6
• 申請日: 2021-01-26
• 公開（公告）號: CN112852653A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 劉龍;陳堅;呂雪芹;堵國成;李江華;徐雅夢;房峻
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N9/02;C12N9/10;C12N9/88;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/60;C12P19/56;C12R1/865
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

1.一種從頭合成萊鮑迪苷M的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述的釀酒酵母工程菌整合表達了貝殼杉烯合酶fpps、貝殼杉烯合酶ks、貝殼杉烯酸氧化酶ko、甜菊醇合酶kah、UDP葡萄糖基轉移酶ugt74g1、UDP葡萄糖基轉移酶ugt85C2、UDP葡萄糖基轉移酶eugt11和UDP葡萄糖基轉移酶ugt76g1。

2.根據權利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述的釀酒酵母工程菌是以啟動子P_gal1/10控制基因表達。

3.根據權利要求2所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述的啟動子P_gal1/10是由β-半乳糖和葡萄糖共同誘導的啟動子Gal1和Gal10組成的雙向啟動子。

4.根據權利要求3所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述的啟動子P_gal1/10的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5.根據權利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，貝殼杉烯合酶fpps的NCBI編號為P08836.2，貝殼杉烯合酶ks的NCBI編號為Q9UVY5，貝殼杉烯酸氧化酶ko的NCBI編號為AAQ63464.1，甜菊醇合酶kah的NCBI編號為NP_197872.1，UDP葡萄糖基轉移酶ugt74g1的NCBI編號為Q6VAA6.1，UDP葡萄糖基轉移酶ugt85C2的NCBI編號為Q6VAB0.1，UDP葡萄糖基轉移酶eugt11的NCBI編號為AAS07253.1，UDP葡萄糖基轉移酶ugt76g1的NCBI編號為AGL95113.1。

6.根據權利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，貝殼杉烯合酶基因和貝殼杉烯合酶基因插入釀酒酵母基因組308a位點；貝殼杉烯酸氧化酶基因插入釀酒酵母基因組1014a位點；甜菊醇合酶基因插入釀酒酵母基因組1309a位點；UDP葡萄糖基轉移酶基因和UDP葡萄糖基轉移酶基因插入1622a位點；UDP葡萄糖基轉移酶基因和UDP葡萄糖基轉移酶基因插入gal80位點。

7.根據權利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述的釀酒酵母工程菌還包括，將P_gal1/10雙向啟動子控制的甲羥戊酸途徑中的異戊烯基雙磷酸鹽-異構酶基因idi和已切除N-端內質網定位信號肽的羥基甲基戊二酰-CoA還原酶基因thmg1整合至基因組的208a位點。

8.權利要求1～7任一項所述的釀酒酵母工程菌在發酵生產萊鮑迪苷M中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述的應用是將所述的釀酒酵母工程菌按照1-5％接種量接種至發酵培養基中，于28-32℃、200-250rpm條件下培養90-100h。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述的發酵培養基包括(g/L)：葡萄糖30～50，蛋白胨10～30，酵母粉5～15。