[發(fā)明專利]一種基于葡萄糖信號(hào)的便攜式核酸檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110102222.4
• 申請(qǐng)日: 2021-01-26
• 公開（公告）號(hào): CN114790492A
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐志南;黃迪;石朱偉;方蒙君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N11/14;C12R1/93
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 劉曉春

1.一種基于葡萄糖信號(hào)的便攜式核酸檢測(cè)方法，其特征在于包括如下步驟：

步驟一：借助核酸擴(kuò)增技術(shù)對(duì)核酸檢測(cè)片段進(jìn)行擴(kuò)增；

步驟二：在crRNA的介導(dǎo)下，Cas12a可特異性識(shí)別擴(kuò)增產(chǎn)物，利用其核酸酶活性釋放借助ssDNA偶聯(lián)于磁珠上的具有催化水解產(chǎn)生葡萄糖功能的產(chǎn)糖酶；

步驟三：通過磁分離，游離的產(chǎn)糖酶水解其對(duì)應(yīng)底物，并產(chǎn)生葡萄糖；

步驟四：借助便攜式血糖儀對(duì)葡萄糖信號(hào)進(jìn)行快速讀取。

2.如權(quán)利要求1所述的一種基于葡萄糖信號(hào)的便攜式核酸檢測(cè)方法，其特征在于：當(dāng)用于SARS-CoV-2檢測(cè)時(shí)，步驟一中所用的擴(kuò)增方法為RT-RPA，目標(biāo)擴(kuò)增片段序列包括：

N1-Target，即序列表SEQ ID No.1序列：

5’-AUUGGCCGCAAAUUGCACAAUUUGCCCCCAGCGCUUCAGCGUUCUUCGGA-3’；

N2-Target，即序列表SEQ ID No.2序列：

5’-UUGGAUGACAAAGAUCCAAAUUUCAAAGAUCAAGUCAUUUUGCUGAAUAA-3’；

M1-Target，即序列表SEQ ID No.3序列：

5’-CAAUGGAACCUAGUAAUAGGUUUCCUAUUCCUUACAUGGAUUUGUCUUCU-3’；

M2-Target，即序列表SEQ ID No.4序列：

5’-CUUGUUUUGUGCUUGCUGCUGUUUACAGAAUAAAUUGGAUCACCGGUGGA-3’；

S1-Target，即序列表SEQ ID No.5序列：

5’-CCCCCUGCAUACACUAAUUCUUUCACACGUGGUGUUUAUUACCCUGACAA-3’；

S2-Target，即序列表SEQ ID No.6序列：

5’-CGCCACCAGAUUUGCAUCUGUUUAUGCUUGGAACAGGAAGAGAAUCAGCA-3’；

E1-Target，即序列表SEQ ID No.7序列：

5’-UAGUUAAUAGCGUACUUCUUUUUCUUGCUUUCGUGGUAUUCUUGCUAGUU-3’；

E2-Target，即序列表SEQ ID No.8序列：

5’-AGCGUACUUCUUUUUCUUGCUUUCGUGGUAUUCUUGCUAGUUACACUAGC-3’。

3.如權(quán)利要求1所述的一種基于葡萄糖信號(hào)的便攜式核酸檢測(cè)方法，其特征在于：當(dāng)用于SARS-CoV-2檢測(cè)時(shí)，步驟二中所用的crRNA序列包括：

N1-crRNA，即序列表SEQ ID No.9序列：

5’-UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUCCCCCAGCGCUUCAGCGUUC-3’；

N2-crRNA，即序列表SEQ ID No.10序列：

5’-UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUAAAGAUCAAGUCAUUUUGCU-3’；

M1-crRNA，即序列表SEQ ID No.11序列：

5’-UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUCUAUUCCUUACAUGGAUUUG-3’；

M2-crRNA，即序列表SEQ ID No.12序列：

5’-UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUCAGAAUAAAUUGGAUCACCG-3’；

S1-crRNA，即序列表SEQ ID No.13序列：

5’-UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUACACGUGGUGUUUAUUACCC-3’；

S2-crRNA，即序列表SEQ ID No.14序列：

5’-UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUUGCUUGGAACAGGAAGAGAA-3’；

E1-crRNA，即序列表SEQ ID No.15序列：

5’-UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUUUGCUUUCGUGGUAUUCUUG-3’；

E2-crRNA，即序列表SEQ ID No.16序列：

5’-UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUGUGGUAUUCUUGCUAGUUAC-3’。