[發(fā)明專利]一種纖維蛋白粘合劑速效止血復(fù)合粉及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110100414.1
• 申請(qǐng)日: 2021-01-26
• 公開（公告）號(hào): CN112843326B
• 公開（公告）日: 2022-11-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉璐;張理火;張軍東;吳劍英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海利康瑞生物工程有限公司
• 主分類號(hào): A61L24/10
• 分類號(hào): A61L24/10;A61L24/00
• 代理公司: 常州佰業(yè)騰飛專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32231
• 代理人: 李嘉寧

1.一種纖維蛋白粘合劑速效止血復(fù)合粉的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)纖維蛋白原混懸液制備：于-3～4℃無水乙醇中，用均質(zhì)機(jī)粉碎精制纖維蛋白原沉淀至粒徑0.2～200μm，加入粉碎至粒徑5～200μm的藥用輔料，混合均勻，得纖維蛋白原混懸液；其中，精制纖維蛋白原沉淀2～5％、藥用輔料5～12％、余量為無水乙醇；

精制纖維蛋白原沉淀的制備過程包括如下步驟：

1)冰凍血漿于25～37℃水浴中融解，按終濃度0.2～1.2％的比例加入磷酸三丁酯和0.8～1.2％比例加入聚山梨酯80，混勻，25±1℃攪拌保溫5～7h；血漿降溫至-3～4℃，按乙醇終濃度6～12％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，離心收集沉淀，得一次纖維蛋白原沉淀；

2)于-3～4℃、6～12％乙醇溶液中粉碎步驟1)制得的一次纖維蛋白原沉淀，攪拌10～60min，離心收集沉淀；于復(fù)溶液中粉碎沉淀，所述復(fù)溶液中含有0.625～1.4％枸櫞酸鈉、0.425～0.85％氯化鈉，pH6.8～7.2；

25～37℃復(fù)溶30～90min，得一次復(fù)溶液；一次復(fù)溶液降溫至-3～4℃，按乙醇終濃度6～12％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，離心收集沉淀，得二次纖維蛋白原沉淀；

3)于復(fù)溶液中粉碎步驟2)制得的二次纖維蛋白原沉淀，所述復(fù)溶液中含有0.625～1.4％枸櫞酸鈉、0.425～0.85％氯化鈉，pH6.8～7.2；

25～37℃復(fù)溶30～90min，得二次復(fù)溶液；二次復(fù)溶液超濾濃縮透析至濃縮液中纖維蛋白原含量為10～25mg/ml；濃縮液降溫至-3～4℃，按乙醇終濃度6～12％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，離心收集沉淀，得三次纖維蛋白原沉淀；

4)于-3～4℃無水乙醇中粉碎步驟3)制得的三次纖維蛋白原沉淀，攪拌2～8min，離心收集沉淀，重復(fù)2～5次，即得精制纖維蛋白原沉淀；

所述纖維蛋白原懸浮液中含有纖維蛋白原和凝血因子XIII，所述凝血因子XIII在纖維蛋白原中的用量為0.1～0.4IU/mg；

(2)凝血酶混懸液制備：于-3～4℃無水乙醇中，用均質(zhì)機(jī)粉碎精制凝血酶沉淀至粒徑0.2～200μm，加入粉碎至粒徑5～200μm的藥用輔料，混合均勻，得凝血酶混懸液；其中，精制凝血酶沉淀0.1～0.5％、藥用輔料1～8％、余量為無水乙醇；所述凝血酶懸浮液中止血成分為凝血酶和氯化鈣，質(zhì)量比為(0.4～0.8):1；

精制凝血酶沉淀的制備過程包括如下步驟：

1)冰凍血漿于25～37℃水浴中融解，按終濃度0.2～1.2％比例加入磷酸三丁酯和0.8～1.2％比例加入聚山梨酯80，25±1℃攪拌保溫5～7h；或取精制纖維蛋白原沉淀的制備過程中步驟1)的一次纖維蛋白原沉淀上清液；

按照每升血漿或上清液加50～120ml濃度為0.85～1.2mol/L氯化鋇溶液，攪拌30～40min，靜置20～30min，離心收集沉淀，得凝血酶原鋇鹽沉淀；

2)取步驟1)制得的凝血酶原鋇鹽沉淀，加0.25～0.75倍血漿體積的注射用水漂洗，攪拌2～8min，靜置5～30min，排上清液，重復(fù)2～5次；將漂洗后的沉淀溶解于0.1～0.5倍血漿體積的2.5～5.5％的枸櫞酸鈉溶液，常溫?cái)嚢?0～90min，得復(fù)溶液；

對(duì)復(fù)溶液進(jìn)行超濾濃縮透析，濃縮液體積為0.05～0.2倍血漿體積，加入氯化鈣溶液至鈣離子終濃度為0.01～0.04mol/L，調(diào)節(jié)pH至7.0～7.6，于20～30℃激活24～72h；激活結(jié)束后，超濾濃縮至濃縮液中凝血酶含量為10～25mg/ml；濃縮液降溫至-3～4℃，按乙醇終濃度6～19％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，離心收集沉淀，得凝血酶沉淀；

3)于-3～4℃無水乙醇中粉碎步驟2)制得的凝血酶沉淀，攪拌2～8min，離心收集沉淀，重復(fù)2～5次，即得精制凝血酶沉淀；

(3)將已制備的纖維蛋白原混懸液和凝血酶混懸液充分混合，灌裝，真空干燥，輻射滅菌，制得纖維蛋白粘合劑速效止血復(fù)合粉。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維蛋白粘合劑速效止血復(fù)合粉的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)中的藥用輔料為海藻糖、氯化鈣、氯化鈉、醋酸鈉、枸櫞酸鈉、甘氨酸、鹽酸精氨酸、蔗糖、右旋糖酐20中的一種或幾種。