[發(fā)明專利]一種鑒定番茄頸腐基腐病抗性基因Frl檢測的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110100363.2
• 申請日: 2021-03-09
• 公開（公告）號: CN112725502A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發(fā)明（設計）人: 金鳳媚;薛俊;孫海波;郝志愚
• 申請（專利權）人: 天津市農業(yè)科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

1. 一種鑒定番茄頸腐基腐病抗性基因的特異性引物：

HRMC2F4: GGTACAGTATCAGTATGTCATCC

HRMC2R4：CACAAATCCTTATCTCTCTC。

2.采用權利要求1所述的特異性引物進行番茄頸腐基腐病抗性基因Frl檢測的方法，其特征在于按如下步驟進行

（1）材料：待檢測的番茄

（2）方法

1）育苗將番茄種子播于育苗盤中每穴2粒，常規(guī)管理，待到2片真葉時進行檢測；

2）DNA提取：采用CTAB法進行DNA提??；

3）HRM擴增

HRM分析的引物對：

HRMC2F4:GGTACAGTATCAGTATGTCATCC

HRMC2R4：CACAAATCCTTATCTCTCTC

PCR 擴增和高分辨率熔解曲線分析在Quantstudio 3熒光定量PCR 儀上進行，反應總體積為20μL，包括模板DNA 20-60 ng，premix 10uL，20×Evagreen 1uL, 5^，端引物（10μmol/L）0.4μL，3^，端引物（10μmol/L ）0.4μL；

PCR 擴增程序：95 ℃預變性10 min，然后按95 ℃變性10 min，55 ℃退火15 s，72 ℃延伸10 s 進行45 個循環(huán)；

擴增產物HRM 檢測程序為：95 ℃ 1 min，40 ℃ 1 min，65 ℃ 1 s，在65 ℃升溫至95℃的過程中，以25 次·℃^-1 的頻率收集熒光信息，最后降溫至40 ℃，利用HRM軟件（Version3.1）進行高分辨率熔解曲線分析。

3.權利要求2所述番茄頸腐基腐病抗性基因Frl檢測方法在準確區(qū)分出番茄頸腐基腐病抗感性方面的應用。