[發明專利]一種缺血性腦卒篩查試劑盒及制備方法

在審

• 申請號: 202110099950.4
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN112760366A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 王勇;陳健;王文波;閆建國;盧慧玲
• 申請（專利權）人: 桂林醫學院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12M1/38;C12M1/36;C12M1/34;C12M1/00
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 王峰剛

本發明屬于試劑盒制備技術領域，公開了一種缺血性腦卒篩查試劑盒及制備方法，所述缺血性腦卒篩查試劑盒包括試劑盒殼體、PCR組件、產品說明書；所述試劑盒殼體包括上殼體與下殼體；所述PCR組件包括PCR反應組件、PCR產物純化組件、PCR測序組件。本發明建立了進行PCR擴增、純化及測序的方法，能夠實現對缺血性腦卒標記物的精確獲取，并且進行PCR檢測的方案更簡便，只需要進行血液的處理、試劑盒的反應和反應后的測序即可實現，比現行實驗室PCR擴增的方法程序更為便捷。本發明的試劑盒設計合理，能夠得到缺血性腦卒發生風險的預測，實現缺血性腦卒篩選，降低篩選成本。

技術領域

本發明屬于試劑盒制備技術領域，尤其涉及一種缺血性腦卒篩查試劑盒及制備方法。

背景技術

目前：根據世界衛生組織(WHO)公布的資料顯示，腦卒中是全球威脅人類健康的重大疾病之一，是目前首要的致殘和僅次于癌癥和心血管疾病的第三大致死性疾病。流行病學顯示，腦卒中發病呈年輕化和逐年遞增的趨勢。腦卒中根據病因的不同主要分為缺血性和出血性腦卒中，其中缺血性腦卒中占87％。研究揭示影響腦卒中發生、發展的主要病理機制包括能量代謝障礙、神經元的過度去極化、興奮性毒性損傷、離子穩態失衡、炎癥與免疫障礙、凋亡及自噬等。控制腦卒中病死率并提高生存質量是當前醫學研究亟待解決的難題。目前美國FDA批準用于治療腦卒中的僅組織型纖維蛋白原酶原激活劑(tPA)，由于其嚴格的治療時間窗及易誘發腦出血等并發癥極大地限制了其臨床的廣泛應用，腦卒中的藥物研發仍任重道遠。隨著基因工程研究的深入，科學家對運用基因工程研制藥物表現出濃厚的興趣。但是目前對缺血性腦卒篩查的方法操作復雜，暫無可以實現缺血性腦卒篩查的試劑盒。

通過上述分析，現有技術存在的問題及缺陷為：目前對缺血性腦卒篩查的方法操作復雜，暫無可以實現缺血性腦卒篩查的試劑盒。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種缺血性腦卒篩查試劑盒及制備方法。

本發明是這樣實現的，一種缺血性腦卒篩查試劑盒的應用方法，所述缺血性腦卒篩查試劑盒的應用方法包括以下步驟：

步驟一，通過試劑盒制備模塊進行缺血性腦卒篩查試劑盒的制備；通過血液采集模塊利用血液采集程序進行患者靜脈血的采集；通過血清分離模塊利用血清分離程序進行采集的靜脈血中血清的分離；

所述通過試劑盒制備模塊進行缺血性腦卒篩查試劑盒的制備包括：

(1.1)將下殼體平放在水平面上，在下殼體內部的底端使用固定膠水進行點涂，將底板的四個角粘貼在下殼體上并擠壓出二者間的氣泡，保持底板表面的平整；

(1.2)按照自下而上的順序進行吸水層、PCR反應組件的連接，得到檢測用復合墊片；將檢測用復合墊片進行裁剪，并將裁剪后的復合墊片覆蓋在底板上；

(1.3)使用熱壓工藝進行底板與復合墊片的熱壓，將復合墊片的邊緣與底板進行完全融合；

(1.4)進行反應檢測區與樣品滴加區的劃分并對劃分的兩個區域進行分別標記；將上殼體上的反應檢測區、樣品滴加區與下殼體內部劃定的反應檢測區、樣品滴加區進行對應；

(1.5)部署完畢后，使用封閉膠水進行上殼體與下殼體連接處的涂擦，膠水凝固得到缺血性腦卒篩查試劑盒；

步驟二，通過DNA提取模塊利用DNA提取程序進行分離的血清中DNA的提取；將提取的DNA滴加至試劑盒的樣品滴加區；

步驟三，通過PCR擴增模塊利用制備得到的試劑盒進行PCR擴增，得到反應結束后的試劑盒；

步驟四，將試劑盒轉移至實驗室，進行PCR純化，并通過PCR測序模塊利用PCR測序程序進行PCR測序；

步驟五，通過測序結果分析模塊利用測序結果分析程序進行測序結果的分析，得到miR-98的表達水平；