[發明專利]一種缺血性腦卒篩查試劑盒及制備方法

在審

• 申請號: 202110099950.4
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN112760366A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 王勇;陳健;王文波;閆建國;盧慧玲
• 申請（專利權）人: 桂林醫學院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12M1/38;C12M1/36;C12M1/34;C12M1/00
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 王峰剛

1.一種缺血性腦卒篩查試劑盒的應用方法，其特征在于，所述缺血性腦卒篩查試劑盒的應用方法包括以下步驟：

步驟一，通過試劑盒制備模塊進行缺血性腦卒篩查試劑盒的制備；通過血液采集模塊利用血液采集程序進行患者靜脈血的采集；通過血清分離模塊利用血清分離程序進行采集的靜脈血中血清的分離；

所述通過試劑盒制備模塊進行缺血性腦卒篩查試劑盒的制備包括以下步驟：

(1.1)將下殼體平放在水平面上，在下殼體內部的底端使用固定膠水進行點涂，將底板的四個角粘貼在下殼體上并擠壓出二者間的氣泡，保持底板表面的平整；

(1.2)按照自下而上的順序進行吸水層、PCR反應組件的連接，得到檢測用復合墊片；將檢測用復合墊片進行裁剪，并將裁剪后的復合墊片覆蓋在底板上；

(1.3)使用熱壓工藝進行底板與復合墊片的熱壓，將復合墊片的邊緣與底板進行完全融合；

(1.4)進行反應檢測區與樣品滴加區的劃分并對劃分的兩個區域進行分別標記；將上殼體上的反應檢測區、樣品滴加區與下殼體內部劃定的反應檢測區、樣品滴加區進行對應；

(1.5)部署完畢后，使用封閉膠水進行上殼體與下殼體連接處的涂擦，膠水凝固得到缺血性腦卒篩查試劑盒；

步驟二，通過DNA提取模塊利用DNA提取程序進行分離的血清中DNA的提取；將提取的DNA滴加至試劑盒的樣品滴加區；

步驟三，通過PCR擴增模塊利用制備得到的試劑盒進行PCR擴增，得到反應結束后的試劑盒；

步驟四，將試劑盒轉移至實驗室，進行PCR純化，并通過PCR測序模塊利用PCR測序程序進行PCR測序；

步驟五，通過測序結果分析模塊利用測序結果分析程序進行測序結果的分析，得到miR-98的表達水平；

步驟六，通過風險提示模塊利用風險提示程序在miR-98的表達水平低于閾值時進行缺血性腦卒風險的提示。

2.如權利要求1所述缺血性腦卒篩查試劑盒的應用方法，其特征在于，步驟(1.3)中，所述使用熱壓工藝進行底板與復合墊片的熱壓，包括：

1)設定熱壓機進行熱壓的模式為區域熱壓，以及設定熱壓方式為區域輪廓熱壓；

2)設定區域輪廓為長方形，且所述長方形的長、寬規格依據復合墊片的規格確定；

3)開啟熱壓機，進行預熱壓；

4)預熱壓結束后進行熱壓處理，靜置晾涼；

5)對晾涼后的墊片進行檢查，查看熱壓部位密實度，若密實度較差則再次進行熱壓。

3.如權利要求2所述缺血性腦卒篩查試劑盒的應用方法，其特征在于，所述預熱壓的溫度為80～85℃，預熱壓時間為2～5s。

4.如權利要求2所述缺血性腦卒篩查試劑盒的應用方法，其特征在于，所述熱壓的溫度為110～130℃，預熱壓時間為3～6s。

5.如權利要求1所述缺血性腦卒篩查試劑盒的應用方法，其特征在于，所述使用封閉膠水進行上殼體與下殼體連接處的涂擦，膠水凝固得到缺血性腦卒篩查試劑盒之后還需進行：

將得到缺血性腦卒篩查試劑盒表面進行覆膜，連同產品說明書裝入包裝盒中。

6.如權利要求1所述缺血性腦卒篩查試劑盒的應用方法，其特征在于，步驟一中，所述通過血清分離模塊利用血清分離程序進行采集的靜脈血中血清的分離，包括：

步驟Ⅰ，將采集的靜脈血置于采血管內，進行10～25min恒溫靜置；

步驟Ⅱ，設定離心轉速為800～900r/min，將靜置后的靜脈血進行離心；

步驟Ⅲ，離心結束后，將采血管置于37℃水中水浴靜置；

步驟Ⅳ，對采血管內的物質進行纖維蛋白原剝離；

步驟Ⅴ，進行沉淀。

7.如權利要求1所述缺血性腦卒篩查試劑盒的應用方法，其特征在于，步驟四中，所述PCR純化包括：在試劑盒中構建PCR純化體系設定，反應條件為37℃反應20min，68℃反應20min。