[發明專利]一種間充質干細胞培養方法

在審

• 申請號: 202110098555.4
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN112626014A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 梅建勛;歐陽建華;汪凱;何偉賢;付引梅;譚慕華;梁鍵全
• 申請（專利權）人: 廣東美賽爾細胞生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12M3/04;C12M3/02;C12M3/00;C12M1/38;C12M1/34;C12M1/04;C12M1/02
• 代理公司: 廣州博士科創知識產權代理有限公司 44663
• 代理人: 宋佳

本發明提供一種間充質干細胞培養方法，A：放置細胞袋，先將無血清無外源蛋白成份明確間充質干細胞培養基放置入細胞的細胞袋中，隨后通過微載體Cytodex 1貼壁式干細胞培養方式，將細胞袋放置在培養裝置內；B：培養細胞，將細胞袋放置在培養裝置的內部進行4?5天的周期性培養，期間，每隔一天需要從細胞袋無菌取樣口用無菌注射器抽取5 ml?10 ml培養液進行鏡檢及支原體、內毒素等安全性質量檢測，此外，細胞袋需要放置在防沉機構上，按照預設的程序開始進行間歇性的搖晃，此間充質干細胞培養方法的結構簡單、操作便捷，可以通過送料機構將細胞袋自行送入到培養裝置內，而防沉機構的存在便于更好的對細胞進行培養，此培養裝置的實用性較高。

技術領域

本發明涉及間充質干細胞培養技術領域，尤其涉及一種間充質干細胞培養方法。

背景技術

間充質干細胞是一種多能干細胞，它具有干細胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力。在臨床應用也最多，與造血干細胞聯合應用，可以提高移植的成功率，加速造血重建。當患者接受大劑量化療后，將間充質干細胞與造血干細胞一同輸入，可明顯加速患者血細胞恢復時間，且安全無不良反應，間充質干細胞不僅存在于骨髓中，也存在于骨骼肌、骨外膜和骨小梁中。由于它分化的組織類型十分廣泛，因此臨床應用價值不菲。

但是在現在的細胞培養中，多為人為式放置細胞袋，同時，細胞袋在長時間的培養中會產生聚集沉降的現象，不利于使用者對細胞進行培養。

因此，有必要提供一種新的間充質干細胞培養方法解決上述技術問題。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明是提供一種可以進行自動式上料和間歇式晃動的間充質干細胞培養方法。

本發明提供的間充質干細胞培養方法包括：包括如下步驟：

A：放置細胞袋，先將無血清無外源蛋白成份明確間充質干細胞培養基放置入細胞的細胞袋中，隨后通過微載體Cytodex 1貼壁式干細胞培養方式，將細胞袋放置在培養培養裝置內；

B：培養細胞，將細胞袋放置在培養裝置的內部進行4-5天的周期性培養，期間，每隔一天需要從細胞袋無菌取樣口用無菌注射器抽取 5 ml-10 ml 培養液進行鏡檢及支原體、內毒素等安全性質量檢測，此外，細胞袋需要放置在防沉機構上，按照預設的程序開始進行間歇性的搖晃，防止細胞在細胞袋內產生聚集沉降現象即可；

C：提取細胞，培養 4-5 天后將細胞微載體懸浮液從細胞袋出液管道輸出至細胞收集瓶，棄上清，DPBS 洗滌一遍，加入 Tryple 消化酶，溫和搖勻消化 10 min-15 min。靜置，待微載體沉降后，吸取細胞懸浮液。DPBS 再洗滌 2 遍，吸取細胞懸浮液，離心400*g，5min，收集細胞，計數。

所述步驟A-B中的培養裝置包括箱體、送料機構、閉合機構、防沉機構、支撐墊和恒溫機構，所述箱體的底部四角均固定安裝有支撐墊，所述箱體的底端固定安裝有送料機構，所述箱體的一側固定安裝有閉合機構，所述送料機構的頂部固定安裝有防沉機構，所述箱體的內部頂端固定安裝有恒溫機構，所述箱體的一端固定安裝有安裝座，所述安裝座的頂部固定安裝有連接管，所述連接管通過導管與換風裝置的輸出端固定連接，所述導管的一端與連接管的一端固定連接，且導管的另一端與換風機裝置的輸出端固定連接。

所述送料機構包括電機、送料架、送料板、安裝架、絲桿、移動塊、滑動架和滑輪，所述箱體的內部固定安裝有安裝架，所述安裝架的一端固定安裝有電機，所述安裝架內通過轉軸轉動連接有絲桿，所述電機的輸出端穿過安裝架與絲桿的一端固定連接，所述安裝架的兩側均設有送料架，且送料架均固定安裝在箱體的內部底端，兩個所述送料架均通過滑輪滑動連接有滑動架，且滑輪均通過轉軸轉動連接在滑動架的一側，兩個所述滑動架分別固定安裝在送料板的底部兩端，所述送料板的底部中央固定安裝有移動塊，所述移動塊與絲桿嚙合傳動連接。