[發明專利]一種間充質干細胞培養方法

在審

• 申請號: 202110098555.4
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN112626014A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 梅建勛;歐陽建華;汪凱;何偉賢;付引梅;譚慕華;梁鍵全
• 申請（專利權）人: 廣東美賽爾細胞生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12M3/04;C12M3/02;C12M3/00;C12M1/38;C12M1/34;C12M1/04;C12M1/02
• 代理公司: 廣州博士科創知識產權代理有限公司 44663
• 代理人: 宋佳

1.一種間充質干細胞培養方法，其特征在于，包括如下步驟：

A：放置細胞袋，先將無血清無外源蛋白成份明確間充質干細胞培養基放置入細胞的細胞袋中，隨后通過微載體貼壁式干細胞培養方式，將細胞袋放置在培養裝置內；

B：培養細胞，將細胞袋放置在培養裝置的內部進行4-5天的周期性培養，期間，每隔一天需要從細胞袋無菌取樣口用無菌注射器抽取 5 ml-10 ml 培養液進行鏡檢及支原體、內毒素等安全性質量檢測，此外，細胞袋需要放置在防沉機構上，按照預設的程序開始進行間歇性的搖晃，防止細胞在細胞袋內產生聚集沉降現象即可；

C：提取細胞，培養 4-5 天后將細胞微載體懸浮液從細胞袋出液管道輸出至細胞收集瓶，棄上清，DPBS 洗滌一遍，加入Tryple消化酶，溫和搖勻消化 10 min-15 min；

靜置，待微載體沉降后，吸取細胞懸浮液；

DPBS 再洗滌 2 遍，吸取細胞懸浮液，離心400*g，5 min，收集細胞，計數；

所述步驟A-B中的培養裝置包括箱體（1）、送料機構（2）、閉合機構（3）、防沉機構（4）、支撐墊（5）和恒溫機構（6），所述箱體（1）的底部四角均固定安裝有支撐墊（5），所述箱體（1）的底端固定安裝有送料機構（2），所述箱體（1）的一側固定安裝有閉合機構（3），所述送料機構（2）的頂部固定安裝有防沉機構（4），所述箱體（1）的內部頂端固定安裝有恒溫機構（6），所述箱體（1）的一端固定安裝有安裝座（8），所述安裝座（8）的頂部固定安裝有連接管（9），所述連接管（9）通過導管（10）與換風裝置（10）的輸出端固定連接，所述導管（10）的一端與連接管（9）的一端固定連接，且導管（10）的另一端與換風裝置（11）的輸出端固定連接。

2.根據權利要求1所述的間充質干細胞培養方法，其特征在于，所述送料機構（2）包括電機（21）、送料架（22）、送料板（23）、安裝架（24）、絲桿（25）、移動塊（26）、滑動架（27）和滑輪（28），所述箱體（1）的內部固定安裝有安裝架（24），所述安裝架（24）的一端固定安裝有電機（21），所述安裝架（24）內通過轉軸轉動連接有絲桿（25），所述電機（21）的輸出端穿過安裝架（24）與絲桿（25）的一端固定連接，所述安裝架（24）的兩側均設有送料架（22），且送料架（22）均固定安裝在箱體（1）的內部底端，兩個所述送料架（22）均通過滑輪（28）滑動連接有滑動架（27），且滑輪（28）均通過轉軸轉動連接在滑動架（27）的一側，兩個所述滑動架（27）分別固定安裝在送料板（23）的底部兩端，所述送料板（23）的底部中央固定安裝有移動塊（26），所述移動塊（26）與絲桿（25）嚙合傳動連接。

3.根據權利要求1所述的間充質干細胞培養方法，其特征在于，所述閉合機構（3）包括安裝架（31）、閉合門（32）、觀察窗（33）、通風網（34）、密封條（35）和把手（36），所述箱體（1）的一側固定安裝有安裝架（31），所述安裝架（31）通過轉軸轉動連接有閉合門（32），所述閉合門（32）的一側固定安裝有密封條（35），所述閉合門（32）的中央固定安裝有觀察窗（33），所述觀察窗（33）的底部設有通風網（34），且通風網（34）固定安裝閉合門（32）的底端，所述閉合門（32）遠離密封條（35）的一側固定安裝有把手（36）。

4.根據權利要求2所述的間充質干細胞培養方法，其特征在于，所述防沉機構（4）包括承載板（41）、轉動電機（42）、凸輪（43）、限位柱（44）、彈簧（45）、安裝柱（46）和轉動輪（47），所述送料板（23）的頂部固定安裝有轉動電機（42），所述轉動電機（42）的輸出端固定安裝有凸輪（43），所述送料板（23）的頂部設有承載板（41），所述承載板（41）的底部四角均固定安裝有限位柱（44），所述限位柱（44）的底端均滑動連接在承載板（41）上，且承載板（41）的底部均套接有彈簧（45），所述彈簧（45）安裝在送料板（23）的頂部，且送料板（23）的頂部開設有與彈簧（45）相互配合的凹槽，所述承載板（41）的底部中央固定安裝有安裝柱（46），所述安裝柱（46）的底端通過轉軸轉動連接有轉動輪（47），且轉動輪（47）與凸輪（43）之間傳動配合。