[發明專利]一種抗原特異性Treg及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110097235.7
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN112941030B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 李明謙;呂國悅;張鵬
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/12;C12N5/0783;C12N5/0784;A61K39/00;A61P37/02
• 代理公司: 北京專贏專利代理有限公司 11797
• 代理人: 李斌

本發明適用于生物技術領域，提供了一種抗原特異性Treg的制備方法和應用，該制備方法包括以下步驟：制備受體tolDC；制備含有供體MHC?I分子mRNA的全部CDS區序列的帶有T7啟動子的質粒，然后應用體外轉錄技術制備供體MHC?I分子的ivt?mRNA；將ivt?mRNA轉染至上述受體tolDC中，獲得表達遞呈供體MHC?I分子抗原的受體tolDC；將表達遞呈供體MHC?I分子抗原的受體tolDC，與受體nTreg細胞在含有IL?2的條件下進行共培養，以獲得供體MHC?I分子抗原特異性Treg。該制備方法可制備得到具有恰當TCR?MHC抗原復合體親和力的供體MHC?I抗原特異性的受體Treg細胞。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種抗原特異性Treg及其制備方法和應用。

背景技術

隨著器官保存方法的完善，外科技術的發展以及免疫抑制藥物的不斷研發，器官移植已成為救治終末期器官衰竭患者的有效手段。然而，在同種異體器官移植中，受體與供體主要組織相容性復合物I（MHC-I）的不匹配會引起免疫排斥反應，導致移植器官功能受損，甚至衰竭。雖然免疫抑制藥物的使用可以降低急性排斥反應的發生率，但其并不能有效防止慢性排斥反應的發生與發展，由此所致的移植器官功能損傷大大縮短了移植器官的存活時間，且長期服用免疫抑制藥物會增加患者感染及罹患癌癥的風險，并導致肝腎損傷與心血管疾病。移植免疫耐受是指受體免疫系統對移植物的特異性無應答，但對其它抗原保持正常的免疫應答。誘導器官移植免疫耐受，不但可以規避長期使用免疫抑制藥物引起的副作用，還能防止器官移植后的免疫排斥反應，大大延長移植物的存活時間。因此，開發安全有效的新型器官移植免疫耐受誘導方法，誘導受體建立針對移植物的特異性免疫耐受，具有重要的研究和臨床實用意義。

調節性T細胞（Treg）是一類具有免疫抑制功能的T細胞亞群。應用Treg過繼治療誘導移植后免疫耐受或者輔助免疫抑制藥物減量在臨床評估中已經取得了重要進展。然而，臨床評估中常用的Treg多為體外擴增的非特異性多克隆天然型Treg（nTreg），其所需細胞數量巨大，且制備成本高昂。同時，將大量多克隆nTreg回輸到受者體內后，其傾向于在短時間內大量遷移至外周循環，具有引起患者全身性免疫抑制的風險，甚至誘發病毒感染或惡性腫瘤。與多克隆nTreg相比，應用抗原特異性Treg誘導免疫耐受所需細胞數量更少，效率更高，且其在過繼回輸后更傾向于駐留在靶器官內誘導抗原特異性免疫抑制，不易引起全身性免疫抑制，具有更高的安全性。因此，應用抗原特異性Treg誘導器官移植免疫耐受具有更大的臨床應用潛力。

抗原特異性Treg在誘導移植免疫耐受中具有巨大潛力，其制備方法的開發已成為移植免疫領域研究的熱點。目前，體外制備抗原特異性Treg的方法主要有以下幾種：

(1)?利用基因工程方法體外改造受體nTreg，使其攜帶能夠特異性識別供體抗原的嵌合抗原受體（CAR），從而通過“抗原-抗原受體識別”賦予CAR-Treg誘導供體器官免疫耐受的功能。CAR-Treg對于供體抗原具有較高的親和力，可誘導高效免疫耐受。然而，這種高親和力可能會導致細胞耗竭，影響其高效抑制功能的發揮。同時，由于CAR-Treg表面修飾有外源性抗體片段，機體可產生針對CAR的抗體，導致其在體內被迅速清除。此外，CAR-Treg是否會引起“細胞因子風暴”等副作用還有待進一步研究確認。

(2)?將供體抗原遞呈細胞（APC）與受體Treg前體細胞共培養制備供體抗原特異性Treg。這種方法制備的抗原特異性Treg具有較低的免疫原性以及恰當的T細胞抗原受體（TCR）-MHC抗原復合體親和力，可在體內長期存活并發揮功能。然而，供體APC通過直接抗原遞呈模式誘導的抗原特異性Treg只能調節急性排斥反應，對慢性排斥反應沒有顯著調節作用，無法誘導長期免疫耐受。