[發明專利]一種利用SUMO融合表達系統制備重組肝素酶I的方法及其所制備的SUMO_肝素酶I融合蛋白

在審

• 申請號: 202110097126.5
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN112980820A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 蔣建華;張亮;邢嶺;吳雙;高偉
• 申請（專利權）人: 上海寶維醫藥技術有限公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/70;C12N15/62;C07K19/00
• 代理公司: 上海中外企專利代理事務所(特殊普通合伙) 31387
• 代理人: 孫旭華

1.一種利用SUMO融合表達系統制備重組肝素酶I的方法，其特征在于，包括下列步驟：

S01：選擇來自肝素黃桿菌(Pedobacter heparinus)的肝素酶I序列，其氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，共384aa；

S02：去除信號肽序列，獲得肝素酶I的DNA序列，如SEQIDNo.2；

S03：將所述肝素酶I的DNA序列插入帶有N端SUMO蛋白標簽的pSMART載體質粒；

S04：將正確的質粒轉化至BL21(DE3)大腸桿菌感受態細胞中，挑取單克隆，經發酵和純化獲得SUMO_肝素酶I融合蛋白；

S05：用SUMO蛋白酶將SUMO標簽蛋白從步驟S04所述的SUMO_肝素酶I融合蛋白上切割下來，即獲得肝素酶I。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括融合蛋白表達條件的優化步驟。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白的優化條件是融合蛋白在15℃以0.2mmol/l異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表達。

4.根據權利要求1-3所述的方法，其特征在于，還包括融合蛋白的純化步驟。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白的純化步驟采用Ni柱親和層析方法進行分離純化。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的SUMO標簽蛋白從步驟S04所述的SUMO_肝素酶I融合蛋白上切割下來是包括下列步驟：將所述融合蛋白透析更換緩沖液，加入適量的SUMO蛋白酶，混勻后置于4℃反應過夜，水解后的融合蛋白樣本用Ni柱親和層析方法將帶有6個組氨酸片段的SUMO蛋白標簽(能結合到Ni柱上)與肝素酶I(不能結合到Ni柱上)分離。

7.權利要求1-5任一項所述的方法制備的SUMO_肝素酶I融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.3。

8.權利要求1-5任一項所述的方法制備的肝素酶I。