[發明專利]一株過表達Gis4的釀酒酵母基因工程菌及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 202110096375.2
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN112662576B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發明（設計）人: 應漢杰;蔣穎;陳勇;梁偲策;張濤;朱家慶;趙偉;余斌
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/81;C12N15/66;C12N15/31;C12P7/06;C12R1/865
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 肖明芳

1.一種利用過表達Gis4的釀酒酵母基因工程菌發酵制備乙醇的方法，其特征在于，該菌株由原始釀酒酵母的Gis4基因過表達后改造得到，所述Gis4基因的核苷酸序列如SEQ?IDNO:1所示，所述原始釀酒酵母來源于中國工業微生物菌種保藏管理中心，菌株保藏編號：CICC?1308，其中，通過固定化發酵制備乙醇。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述過表達Gis4的釀酒酵母基因工程菌通過如下步驟構建得到：

（1）以菌株保藏編號：CICC?1308的釀酒酵母的基因組DNA為模板，擴增出Gis4目的基因片段；

（2）利用限制性內切酶獲得線性化質粒pYX212，將Gis4目的基因片段與線性化質粒pYX212導入大腸桿菌DH5α中，獲得DH5α-pYX212-Gis4菌株，提取所獲得的目標大腸桿菌的質粒；

（3）將步驟（2）得到的質粒轉化至釀酒酵母感受態中，即得過表達釀酒酵母基因工程菌。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述限制性內切酶為SacI。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，用限制性核酸內切酶對獲得質粒進行酶切驗證，利用凝膠電泳對取得質粒進行可視化初篩。

5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述固定化發酵以天然有機載體、人工合成高分子載體、人工無機高分子材料、復合材料作為固定化介質。

6.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，發酵的溫度為30℃-40℃。

7.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，發酵的發酵培養基配方如下：50-100?g/L葡萄糖，3-6?g/L蛋白胨、0.1-1?g/L硫酸銨、3-6?g/L磷酸二氫鉀、3-6?g/L酵母膏、0.0-1?g/L硫酸鎂、0.01-1?g/L七水合硫酸亞鐵、0.01-1g/L七水合硫酸鋅，溶劑為水。