[發(fā)明專利]用于阿馬帕里病毒、庫皮科斯病毒和伊派病毒檢測的引物探針組合、試劑盒和方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110096371.4 | 申請日： | 2021-01-25 |
| 公開（公告）號： | CN112662816B | 公開（公告）日： | 2022-05-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李建東;杜珊珊;李阿茜;梁米芳;李德新;王世文;黃曉霞;李川;王芹;孫麗娜;蕪為 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002 | 代理人： | 商秀玲 |
| 地址： | 102206 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 阿馬帕里 病毒 庫皮科斯 檢測 引物 探針 組合 試劑盒 方法 | ||
本發(fā)明涉及病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及用于阿馬帕里病毒、庫皮科斯病毒和伊派病毒檢測的引物探針組合、試劑盒和方法。本發(fā)明提供用于阿馬帕里病毒、庫皮科斯病毒和伊派病毒檢測分別或同時實(shí)時熒光定量RT?PCR檢測的引物探針組合，其含有三對特異性引物和三條特異性探針，其中，所述特異性引物的序列如SEQ ID NO.1?6所示，所述特異性探針的序列如SEQ ID NO.7?9所示。本發(fā)明提供的引物探針組合和檢測方法具有高靈敏性和特異性、可重復(fù)性好、操作簡便、檢測時間短、所需樣本量少、低污染，節(jié)約成本等優(yōu)點(diǎn)，可直接對未知樣本里提取的RNA進(jìn)行檢測，可與傳統(tǒng)檢測方案互補(bǔ)，在病毒的快速檢測中具有較高的應(yīng)用價值。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及用于阿馬帕里病毒、庫皮科斯病毒和伊派病毒檢測的引物探針組合、試劑盒和方法。
背景技術(shù)
沙粒病毒由外膜和核衣殼組成，呈圓形，含有脂質(zhì)(外)胞膜，直徑約為50-300nm(平均110-130nm)。外膜表面覆蓋有一種蛋白組成的、長度約10nm的纖突，內(nèi)部可見不同數(shù)量的來自宿主細(xì)胞的核糖體，在電鏡下形如沙粒樣，沙粒病毒因此而得名。病毒基因組由雙向分節(jié)段的單股負(fù)義鏈RNA組成，較大的為L片段，長度約7400個核苷酸，編碼RNA依賴的RNA聚合酶L蛋白和具有轉(zhuǎn)錄復(fù)制調(diào)節(jié)功能的Z蛋白；較小的為S片段，長度約3400個核苷酸，編碼核蛋白NP和糖蛋白GP。L和S片段在病毒粒子中并非等量，而是以2：1的摩爾比存在。每個片段上的基因分別被含有發(fā)卡結(jié)構(gòu)的非編碼區(qū)隔開，5’端無帽狀結(jié)構(gòu)，3’端序列保守。由于S片段較L片段更為保守，因此常用S片段進(jìn)行病毒進(jìn)化研究和分類鑒定。
根據(jù)國際病毒學(xué)分類委員會(ICTV)2018年最新頒布病毒分類(https://talk.ictvonline.org/taxonomy/)，沙粒病毒科分為4個屬：Antennavirus、Hartmanivirus、Mammarenavirus和Reptarenavirus，包含43個種。哺乳動物沙粒病毒屬(Mammarenavirus)中35個種可分為舊世界沙粒病毒和新世界沙粒病毒，舊世界沙粒病毒中，代表病毒是淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒簡稱LCMV病毒。新世界沙粒病毒主要包括有4個clade，clade A有Pirital，Pichinde，F(xiàn)lexal，Parana和Alloahuayo virus五種病毒；cladeB有Junin,Machupo,Guanarito,Amapari,Tacaribe,Sabia,Cupixi和Chapare viruses八種病毒；clade C有Oliveros和Latino兩種病毒；clade A/Rec包括有Whitewater Arroyo,Tamiami和Bear Canyo三種病毒；Lujo virus屬于新世界沙粒病毒，但不在四個clade中。已發(fā)現(xiàn)可導(dǎo)致人嚴(yán)重疾病的沙粒病毒主要有拉沙病毒(Lassa virus)引起拉沙熱，胡寧病毒(Junin virus)引起阿根廷出血熱，馬秋波病毒(Machupo virus)和查帕雷病毒(Chaparevirus)引起玻利維亞出血熱，盧約病毒(Lujo virus)引起盧約出血熱，瓜納瑞托病毒(Guanarito virus)引起委內(nèi)瑞拉出血熱，薩比亞病毒(Sabid virus)引起巴西出血熱，淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)引起淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎。
阿馬帕里病毒(Amapari virus)于1965年在巴西圭亞那毛鼠(Neacomys guianae)中首次被發(fā)現(xiàn)，該鼠也是阿馬帕里病毒的儲存宿主，阿馬帕里病毒主要局限于巴西阿馬帕地區(qū)的嚙齒類動物中傳播。庫皮科斯病毒(Cupixi virus)于1965年在巴西食米鼠(Oryzomys gaeldi)中首次被發(fā)現(xiàn)，該病毒主要局限于巴西阿馬帕地區(qū)的嚙齒類動物中傳播。伊派病毒(Ippy virus)于1984年在中非共和國尼羅河鼠(Arvicanthis sp)首次被發(fā)現(xiàn)，該病毒主要局限于中非的嚙齒類動物中傳播。
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