[發明專利]環γ-聚谷氨酸涂層智能納米藥物輸送體系及其制備方法

有效

• 申請號: 202110095572.2
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN112826938B
• 公開（公告）日: 2023-03-07
• 發明（設計）人: 張黎明;王超;王蓓蕾;賀茜;王倩倩;王博;鄒帥軍;柳國艷;張福海
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍海軍特色醫學中心
• 主分類號: A61K47/62
• 分類號: A61K47/62;A61K47/69;A61K31/704;A61K47/30;A61P35/00
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 孫躍虹

1.環γ-聚谷氨酸涂層智能納米藥物輸送體系的制備方法，其特征在于，是利用聚合物NLS-LA-PpIX制備陽離子載藥納米膠束，再將環γ-聚谷氨酸通過靜電作用吸附于陽離子載藥納米膠束表面后得到；所述的環γ-聚谷氨酸為9個谷氨酸殘基組成的環狀多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述的聚合物NLS-LA-PpIX的制備方法為：

(1)樹脂溶漲：將2-Chlorotrityl Chloride Resin放入反應管中，加15ml/g DCM，振蕩30min；

(2)接第一個氨基酸：通過沙芯抽濾掉溶劑，加入3倍摩爾過量的Fmoc-Gly-OH氨基酸，加入DMF溶解，再加入10倍摩爾過量的DIEA，振蕩60min；用甲醇封閉；

(3)脫保護：去掉DMF，加15ml/g 20％哌啶DMF溶液，反應5min，去掉DMF并再加15ml/g20％哌啶DMF溶液，繼續反應15min；

(4)檢測：抽掉哌啶溶液，取十幾粒樹脂，用乙醇洗三次，加入檢測試劑檢測，105℃-110℃加熱5min，變深藍色為陽性反應；

(5)洗滌：10ml/g DMF洗兩次，10ml/g DCM洗兩次，10ml/g DMF洗兩次；

(6)縮合：保護氨基酸三倍過量，HBTU三倍過量，均用盡量少DMF溶解，加入反應管，立刻加入DIEA十倍過量，反應30min；

(7)檢測：取十幾粒樹脂，用乙醇洗三次，加入檢測試劑檢測，105℃－110℃加熱5min，無色為陰性反應；

(8)洗滌：10ml/g DMF洗一次，10ml/g DCM洗兩次，10ml/g DMF洗兩次；

(9)重復3至6步操作，從右到左依次連接序列中的氨基酸；其中N端第一個氨基酸為Fmoc-Lys(Dde)-OH；同理接完lipoic acid后去dde，繼續連接PpIX；

(10)抽干，按照下列方法洗樹脂：10ml/g DMF洗兩次，10ml/g甲醇洗兩次，10ml/g DMF洗兩次，10ml/g DCM洗兩次，抽干10min；

(11)從樹脂上切割聚合物：配制切割液：TFA 95％；水1％；EDT 2％；TIS 2％；切割時間：120min；

(12)吹干洗滌：將裂解液用氮氣盡量吹干，用乙醚洗六次，然后常溫揮干；

(13)分析提純：用高效液相色譜將粗品提純，進行質譜鑒定；

色譜條件：色譜柱：Kromasil 100-5C18，4.6mm×250mm，5micron；流動相Buffer A：0.1％TFA in Acetonitrile；Buffer B：0.1％TFA in water；流速：1.0ml/min；梯度比例為0min 65％B，20min 0％B；進樣量：10μL；柱溫：25℃；檢測波長：220nm；

質譜條件：離子源：ESI源；檢測方式：正離子檢測；毛細管電壓：2.8KV；

錐孔電壓：22V；離子源溫度：120℃；

(14)凍干：收集目標聚合物溶液放入凍干機中進行濃縮，凍干成白色粉末。

2.根據權利要求1所述的環γ-聚谷氨酸涂層智能納米藥物輸送體系的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：將濃度為0.25mg/ml的環γ-聚谷氨酸水溶液按照體積比4：1在室溫攪拌下逐滴滴入濃度為2mg/ml的陽離子納米膠束水溶液中，1500rpm攪拌30min后將溶液置于透析袋中，透析除去游離的環γ-聚谷氨酸；將溶液凍干即得。

3.根據權利要求1所述的環γ-聚谷氨酸涂層智能納米藥物輸送體系的制備方法，其特征在于，所述的陽離子載藥納米膠束為載阿霉素納米膠束NLS-LA-PpIX-DOX。

4.根據權利要求3所述的環γ-聚谷氨酸涂層智能納米藥物輸送體系的制備方法，其特征在于，所述的載阿霉素陽離子納米膠束的制備方法為：稱取2mg聚合物NLS-LA-PpIX溶于800μl二氯甲烷中，在強力攪拌條件下，將阿霉素二氯甲烷溶液緩慢滴加入聚合物溶液中，之后將所得溶液在強力攪拌條件下逐滴滴加入純水，使得終體積VR_{二氯甲烷/H2O}＝1：1，邊攪拌邊揮發完全除去二氯甲烷后將溶液轉入透析袋，透析除去未包載的DOX，凍干即得到載阿霉素納米膠束。