[發明專利]一種利用糖苷酶和氧胺化合物修飾DNA的方法

有效

• 申請號: 202110088599.9
• 申請日: 2021-01-22
• 公開（公告）號: CN112920247B
• 公開（公告）日: 2022-12-27
• 發明（設計）人: 于涵洋;楊錦滔;李喆
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C07H21/04
• 分類號: C07H21/04;C07H1/00;C12P19/34
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

1.一種利用糖苷酶和氧胺化合物修飾DNA的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）固相合成帶有非典型堿基的DNA鏈；

（2）所述帶有非典型堿基的DNA鏈在選擇性識別非典型堿基的糖苷酶的催化下，反應產生帶有缺堿基位點的DNA鏈；

（3）所述帶有缺堿基位點的DNA鏈與氧胺化合物反應，生成帶有化學官能團修飾的DNA；

步驟（2）所述缺堿基位點為糖苷酶處理后失去堿基的糖環位點；具體包括如下步驟：將帶有非典型堿基的DNA單鏈與對應的糖苷酶在緩沖液中孵育，之后使用乙醇沉淀的方法將單鏈與糖苷酶分離；或者將帶有非典型堿基的DNA單鏈與帶生物素標記的互補鏈退火得到互補雙鏈，加入對應的糖苷酶在緩沖液中孵育，之后使用乙醇沉淀的方法將雙鏈與糖苷酶分離；

步驟（3）所述氧胺化合物為帶有甲基、羥基乙基、氨基乙基、羧基甲基或芐基中的一種或幾種的氧胺化合物；

所述糖苷酶為尿嘧啶DNA糖苷酶、甲基化嘌呤DNA糖苷酶或8-橋氧鳥嘌呤DNA糖苷酶中的一種或幾種；通過步驟（1）-（3）將正交的多個非典型堿基引入到同一條DNA鏈，順序使用多種糖苷酶處理和氧胺化合物處理，得到不同位點含不同修飾的DNA。

2.根據權利要求1所述的利用糖苷酶和氧胺化合物修飾DNA的方法，其特征在于：不同糖苷酶特異性針對DNA中相應非典型堿基去除并得到缺堿基位點。

3.根據權利要求1所述的利用糖苷酶和氧胺化合物修飾DNA的方法，其特征在于：將多個相同非典型堿基引入到同一條DNA鏈，在多個位點同時引入多個相同的官能團修飾。

4.根據權利要求1所述的利用糖苷酶和氧胺化合物修飾DNA的方法，其特征在于：所述非典型堿基為尿嘧啶、次黃嘌呤、3-甲基腺嘌呤、3-甲基鳥嘌呤、7-甲基鳥嘌呤或氧橋鳥嘌呤中的一種或幾種。

5.根據權利要求1所述的利用糖苷酶和氧胺化合物修飾DNA的方法，其特征在于，步驟（1）具體包括如下步驟：設計具體的修飾位點并選擇相應非典型堿基，合成相應DNA單鏈和對應互補DNA單鏈。

6.根據權利要求1所述的利用糖苷酶和氧胺化合物修飾DNA的方法，其特征在于，步驟（3）的具體包括如下步驟：將所述帶有缺堿基位點的DNA單鏈或者雙鏈，與氧胺化合物在緩沖液中孵育；反應之后，對單鏈使用脫鹽柱脫鹽得到帶有修飾的DNA單鏈，或者將帶有修飾的DNA雙鏈使用鏈霉親和素分離方法得到帶有修飾的DNA單鏈。