[發明專利]一種乳雙歧桿菌高密度發酵培養基及發酵方法

在審

• 申請號: 202110087447.7
• 申請日: 2021-01-22
• 公開（公告）號: CN112813000A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 方曙光;史禎暉;王桂龍
• 申請（專利權）人: 武漢微康益生菌研究院有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 武漢領君知識產權代理事務所(普通合伙) 42248
• 代理人: 汪俊鋒

本發明公開了一種乳雙歧桿菌高密度發酵培養基及發酵方法，屬于發酵工程技術領域。本發明的高密度發酵培養基配方為：乳糖20?30g/L、牛肉浸粉10?15g/L、酵母浸粉10?15g/L、牛骨蛋白胨5?10g/L、磷酸氫二鉀2?5g/L、檸檬酸氫銨2?5g/L、乙酸鈉2?5g/L、硫酸鎂0.2?0.5g/L、硫酸錳0.1?0.2g/L、吐溫?80 1?2mL/L、L?半胱氨酸鹽酸鹽1?2g/L。本發明的高密度發酵方法為：將乳雙歧桿菌種子液接種到高密度發酵培養基中進行發酵，發酵過程中流加中和劑的任一種維持發酵液pH值為5.5～6.0。本發明實現了乳雙歧桿菌的高密度發酵，降低了生產成本、提高了生產效率。

技術領域

本發明屬于發酵工程技術領域，具體涉及一種乳雙歧桿菌高密度發酵培養基及發酵方法。

背景技術

乳雙歧桿菌是人體腸道中常見的益生菌，也是世界上廣泛研究的益生菌菌種之一。乳雙歧桿菌可以產生乙酸、乳酸，來抑制腸道腐敗菌的生長和有毒代謝產物的形成，從而調整腸道菌群，同時乳雙歧桿菌還能刺激腸道蠕動，從而緩解便秘的癥狀。另外，乳雙歧桿菌可以促進人體對乳糖的消化，從而緩解因為乳糖不耐受而引起的腸痙攣、腸脹氣以及腹瀉的癥狀。

在生物技術轉化過程中，低成本轉化、規?；凸I化，是面臨的主要問題。本發明針對乳雙歧桿菌大規模工業化中遇到的生產成本高、發酵技術工藝流程復雜等問題，通過對發酵培養基成分及發酵過程工藝控制進行摸索，實現了乳雙歧桿菌的高密度發酵。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的缺點與不足，提供一種乳雙歧桿菌高密度發酵培養基及發酵方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種乳雙歧桿菌高密度發酵培養基，其配方如下：乳糖20-30g/L、牛肉浸粉10-15g/L、酵母浸粉10-15g/L、牛骨蛋白胨5-10g/L、磷酸氫二鉀2-5g/L、檸檬酸氫銨2-5g/L、乙酸鈉2-5g/L、硫酸鎂0.2-0.5g/L、硫酸錳0.1-0.2g/L、吐溫-80 1-2mL/L、L-半胱氨酸鹽酸鹽1-2g/L。

優選的，所述的乳雙歧桿菌高密度發酵培養基的配方如下：乳糖20g/L、牛肉浸粉10g/L、酵母浸粉10g/L、牛骨蛋白胨10g/L、磷酸氫二鉀3g/L、檸檬酸氫銨3g/L、乙酸鈉5g/L、硫酸鎂0.5g/L、硫酸錳0.1g/L、吐溫-80 1mL/L、L-半胱氨酸鹽酸鹽1g/L。

一種乳雙歧桿菌高密度發酵方法，包括如下步驟：將乳雙歧桿菌種子液接種到上述高密度發酵培養基中，在溫度37～39℃、轉速50～100rpm條件下發酵12～18小時；發酵過程中流加中和劑維持發酵液pH值為5.5～6.0；發酵過程不通氣或通入N₂；當發酵液在600nm波長下的吸光值（OD₆₀₀）不再增加時，終止發酵。所述的中和劑優選為氨水、Na₂CO₃或NaOH中的任一種。

所述的乳雙歧桿菌種子液優選通過包括如下步驟的方法制備：將冷凍保存的乳雙歧桿菌取出接種到5mL的MARS培養基中，在37℃、厭氧條件下進行活化培養；待到24h后，將菌液以2%（V/V）的接種量再接種于MARS培養基中（二代），在37℃、厭氧條件下培養12h后，再以2%的接種量接入MARS培養基中（三代），于37℃、厭氧條件下培養12h后作為種子液。