[發明專利]一種PBMC的CFSE染色方法及其應用在審
| 申請號： | 202110086248.4 | 申請日： | 2021-01-22 |
| 公開（公告）號： | CN112725271A | 公開（公告）日： | 2021-04-30 |
| 發明（設計）人： | 朱灝 | 申請（專利權）人： | 華夏源細胞工程集團股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/078 | 分類號： | C12N5/078;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 上海微策知識產權代理事務所(普通合伙) 31333 | 代理人： | 張靜 |
| 地址： | 201100 上海市閔行*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 pbmc cfse 染色 方法 及其 應用 | ||
1.一種PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
S1，凍存PBMC的復蘇：將PBMC凍存管放入水浴鍋中，搖晃至其完全融化，將融化后的PBMC轉移至含有完全培養基的離心管中，進行離心，棄去上清液，加入適量的培養液重懸PBMC并計數；
S2，PBMC的CFSE染色：調整PBMC的細胞濃度，量取一定體積的細胞懸液，加入CFSE染色液，染色5-10min，再加入預冷的染色終止液，離心、棄去上清液、加入適量的完全培養基重懸。
2.根據權利要求1所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，所述方法具體包括以下步驟：
S1，凍存PBMC的復蘇：將PBMC凍存管放入水浴鍋中，搖晃至其完全融化，將融化后的PBMC轉移至含有完全培養基的離心管中，進行離心，棄去上清液，加入適量的培養液重懸PBMC并計數；
S2，PBMC的CFSE染色：加入磷酸緩沖鹽溶液調整PBMC的細胞濃度，量取5-10ml的細胞懸液，加入CFSE染色液，室溫避光染色5-10min，每隔2-3min顛倒混勻一次，再加入預冷的染色終止液，離心、棄去上清液、加入適量的完全培養基重懸。
3.根據權利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，在步驟S1中，所述PBMC凍存管放入水浴鍋時，水浴鍋的溫度為36-38℃。
4.根據權利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，步驟S1中，所述完全培養基中含有10wt％的胎牛血清。
5.根據權利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，步驟S1中，所述離心時的離心力為300-500g，離心時間為5-10min。
6.根據權利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，步驟S2中，加入磷酸緩沖鹽溶液調整PBMC的細胞濃度后，所述細胞濃度為2×105/ml～2×106/ml。
7.根據權利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，步驟S2中，所述CFSE染色液的終濃度為＜2.5μmol/L。
8.根據權利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，步驟S2中，所述染色終止液的預冷溫度為4～8℃。
9.根據權利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，步驟S2中，所述染色終止液為胎牛血清、小牛血清、人血清中的一種。
10.一種根據權利要求1-9任一項所述的PBMC的CFSE染色方法的應用，其特征在于，所述染色方法可用于間充質干細胞體外抑制淋巴細胞增殖抑制率的檢測方法中。
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