[發(fā)明專利]齊帕特羅半抗原、完全抗原及單克隆抗體的制備和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110080548.1
• 申請(qǐng)日: 2021-01-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112679509A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王選年;郭東光;陳明艷;岳鋒;李文明;李夢(mèng)陽(yáng);孫國(guó)鵬;潘鵬濤;李鵬;朱艷平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新鄉(xiāng)學(xué)院
• 主分類號(hào): C07D487/06
• 分類號(hào): C07D487/06;C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44;G01N33/53;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/58
• 代理公司: 西安正華恒遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61271
• 代理人: 傅曉

1.一種齊帕特羅半抗原的制備方法，其特征在于，包括：

將鹽酸齊帕特羅加入NaOH溶液，萃取后旋蒸溶劑，然后加入4溴丁酸乙酯和無(wú)水碳酸鉀進(jìn)行反應(yīng)，再用乙醇和KOH水溶液回流即得。

2.一種齊帕特羅完全抗原的制備方法，其特征在于，包括：

將權(quán)利要求1制得的齊帕特羅半抗原溶于2-[N-嗎啉基]乙烷磺酸中，再加入EDC和NHS，室溫下攪拌反應(yīng)2-3h，得A液；將BSA和OVA加入2-[N-嗎啉基]乙烷磺酸中，4℃冷藏18-30h，得B液；將A液緩慢滴加至B液中，室溫?cái)嚢?-3h后于PBS溶液中透析3-5天，即得。

3.一種齊帕特羅單克隆抗體的制備方法，其特征在于，包括：

采用權(quán)利要求2制得的齊帕特羅完全抗原與弗氏完全佐劑充分乳化后形成免疫劑，取5-8周齡雌性BALB/c小鼠進(jìn)行免疫，將經(jīng)免疫的小鼠的脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，培養(yǎng)并篩選雜交瘤細(xì)胞，得到能穩(wěn)定分泌齊帕特羅抗體的雜交瘤細(xì)胞的單克隆細(xì)胞株，純化，即得。

4.采用權(quán)利要求3所述的方法制備得到的齊帕特羅單克隆抗體，其特征在于，所述抗體效價(jià)為1:6400，亞型為IgG1，對(duì)齊帕特羅的半數(shù)抑制濃度IC₅₀為0.199ng/mL，最低檢測(cè)限為0.009ng/mL，且與鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、鹽酸多巴胺、溴布特羅、班布特羅、西馬特羅、特布他林、達(dá)氟沙星、泰樂(lè)菌素?zé)o交叉反應(yīng)。

5.權(quán)利要求4所述的齊帕特羅單克隆抗體在制備用于檢測(cè)齊帕特羅殘留的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品為試劑盒或膠體金層析試紙條。

7.一種檢測(cè)齊帕特羅的膠體金層析試紙條，其特征在于，包括權(quán)利要求4所述的齊帕特羅的單克隆抗體。

8.一種檢測(cè)齊帕特羅的ELISA試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求4所述的齊帕特羅的單克隆抗體。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測(cè)齊帕特羅的ELISA試劑盒，其特征在于，包括以下組分：

包被有權(quán)利要求2制得的齊帕特羅完全抗原的酶標(biāo)板、權(quán)利要求4所述的齊帕特羅單克隆抗體工作液、辣根過(guò)氧化物酶-羊抗鼠抗抗體酶標(biāo)記物工作液、齊帕特羅標(biāo)準(zhǔn)品溶液、混合顯色劑、終止液、洗滌液和樣品稀釋液。

10.權(quán)利要求8所述的檢測(cè)齊帕特羅的ELISA試劑盒的使用方法，其特征在于，包括取添加值及計(jì)算檢測(cè)值：取多個(gè)間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA實(shí)驗(yàn)中小分子標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，即得添加值，同一份樣品做多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，將得到的吸光值取平均數(shù)帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算小分子的含量，即得檢測(cè)值。